2025年11月27日下午,有客户咨询到人白蛋白（ALB）试剂盒的操作步骤和使用方法,本试剂盒用于体外定量检测血清 血浆 组织 细胞上清及相关液体样本中人白蛋白（ALB）的含量.试剂盒的有效期为6个月,试剂盒的保存条件2-8℃
人白蛋白（ALB）试剂盒实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）.往预先包被人白蛋白（ALB）抗体的包被微孔中,依次加入标本 标准品 HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤.用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的人白蛋白（ALB）呈正相关.用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值）,计算样品浓度.
人白蛋白（ALB）试剂盒样本处理及要求
1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融.
2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融.
3. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融.
注：标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测.
需要而未提供的试剂和器材
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL 2-20uL 20-200uL 200-1000uL 3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水
试剂盒组成
名称 96 孔配置 48 孔配置 备注
微孔酶标板 8 孔×12 条 8 孔×6 条 无
标准品 0.3mL*6 管 0.3mL*6 管 无
样本稀释液 6mL 3mL 无
检测抗体-HRP 10mL 5mL 无
20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释
底物 A 6mL 3mL 无
底物 B 6mL 3mL 无
终止液 6mL 3mL 无
封板膜 2 张 2 张 无
说明书 1 份 1 份 无
自封袋 1 个 1 个 无
备注：
1. 标准品浓度依次为：240 120 60 30 15 7.5 ng/mL
2. 经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可.当有部分样本值超过最大标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验.
注意事项
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果.所有试剂都必须在使用前达到室温 20-25℃.使用后立即冷藏保存试剂.
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果.在加入底物前确保尽量吸干孔内液体.温育过程中不要让微孔干燥掉.
3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响 OD 值.
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用.
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果.
6. 在储存和温育时避免强光直接照射.
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上.
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体.任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性.
9. 不能使用过期产品.
10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置.
试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用.
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水.
操作步骤
1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃.
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；
3. 样本孔中加入待测样本 50μL；空白孔不加.
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育 60min.
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液（350μL）,静置 1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）.
6. 每孔加入底物 A B 各 50μL,37℃避光孵育 15min.
7. 每孔加入终止液 50μL,15min 内,在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值.
实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度.
试剂盒性能
1. 检测范围：7.5 ng/mL — 240 ng/mL.
2. 灵敏度：最低检测浓度小于 1.0 ng/mL.
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应.
4. 重复性：板内 板间变异系数均小于 15%.
