人脐带间充质干细胞详细说明_企业动态

人脐带间充质干细胞

一细胞基本属性
细胞货号	JW-CL-1972
细胞种属	人
生长情况	贴壁（该细胞为原代提取细胞 ,专用培养体系可以传 2-3 代 ,其他条件下不增殖）
培养条件	原代间充质干细胞体系
培养环境	air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二细胞培养操作
换液周期	2-3 天
培养基体积	T25 瓶 10-12ml； 10cm 皿 12-15ml
传代比例	1 ：2-1 ：3
传代方法	1. 尽量吸干净 T25 瓶原培养基； 2. 加 3-4ml 常温 PBS 轻轻润洗细胞 10-20s ,吸走润洗的 PBS； 3. T25 瓶加 1ml 左右胰酶 ,轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4. 将培养瓶放入 37 度培养箱消化； 5. 消化到细胞间隙变大 ,但未完全脱落时加 2-3ml 完全培养基终止胰酶消化； 6. 混匀细胞 ,900rpm 离心 3-5min ,弃上清； 7. 加新的完全培养基轻轻重悬细胞 ,均匀分到新的培养瓶里； 8. 补足完全培养基 ,将培养瓶放回培养箱静置培养；
注意事项	不同品牌胰酶消化时间差别较大 ,注意严格控制消化时间消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔 ,不要产生过多气泡以免影响细胞状态.
三细胞冻存操作
冻存液配方	不建议冻存该细胞
冻存规格	-
冻存方法	-
注意事项	-

收货处理方式

	发货形式	T25 瓶	冻存管
1	快递保存温度	室温	液氮长期保存或-80 度 3 天以内
2	初步平衡	T25 瓶表面消毒后 ,放 37 度培养箱平衡复温 2h 以上	无须平衡 ,直接放入-80 冰箱或者液氮罐保存
3	处理方式	吸走大部分培养基 ,留 10-12ml 培养基 ,拍照并观察细胞.密度 80%以上即可吸走培养基消化传代 ,若密度低于 80%可以留 10-12 ml 继续培养至细胞密度 80%以上	37 度水浴摇晃尽快融化细胞 ,直接在冻存管内将细胞离心.离心转速以离心力 150g(约 900rpm)左右 , 1min 为宜 ,弃上清 ,沉淀用新鲜培养基重悬后接种到 10cm 培养皿 ,显微镜下观察细胞并拍照 ,24h 后换液一次
4	接种方式	T25 传代首次建议 1:2 传代 ,即 1 瓶 T25 传成两瓶	一管细胞建议接种到 10cm 培养皿或者 T25 瓶
5	注意事项	若贴壁细胞出现漂浮,T25 瓶不开封,放至 37 度培养箱过夜 ,若细胞重新贴壁即说明活性正常 ,按正常操作消化传代即可；若未贴壁 ,收集细胞培养基离心后,将细胞重悬接种到新的培养瓶中	收货时若发现干冰化完 ,检查冻存管是否融化 ,若已融化需直接离心细胞接种观察 ,若未融化可以将细胞按正常步骤保存 ,以上情况及时反馈干冰发货的细胞只能在-80 保存 3 天左右 ,长时间保存会出现活性下降.

特殊情况：

1. 若培养瓶或者冻存管出现破碎或漏液情况,及时拍照联系销售反馈,按指导进行进一步处理.若只是外包装破损一般不影响培养瓶和冻存管,请放心使用.

2. 若无法观察到细胞,建议收集细胞培养基,1200rpm 离心 5min,观察细胞沉淀量,并用少量培养基重悬沉淀后,取部分悬液放到计数板或者载玻片上观察细胞.

3. 部分细胞增殖较快,发货细胞量较多时,培养基可能出现颜色变黄现象.继续培养使用此类培养基时,需要及时观察培养基颜色变化,缩短培养基换液周期,并每瓶多加 2-3ml 培养基.

4. 收货当天不处理细胞时,T25 瓶可以消毒拆封口膜后不拧开瓶盖放 37 度培养箱静置过夜,但不建议超过24h；冻存管可以直接放液氮长期保存或-80 度 3 天以内,必须一周内复苏培养检查,否则将超过一周售后期.

培养操作说明

1. 细胞培养需要充足经验 ,新手或者没有类似细胞培养经验的人建议在专业人士指导下进行操作 ,尤其注意无菌操作贴壁细胞消化时间及细胞培养密度.

2. 部分细胞在传代后时 ,会有以下现象：细胞内会有黑色小点细胞间隙有些颗粒物培养基漂浮一些死细胞.以上都是细胞培养常见现象 ,不影响细胞增殖和实验.

3. 细胞内的黑色颗粒是细胞外分泌泡细胞器折光或者细胞膜表面物质 ,这个属于细胞自身特性 ,无法清除也无法改变 ,具体情况可以参考 ATCC DSMZ 等大型细胞库细胞照片.细胞外的黑色颗粒大部分是细胞碎片 ,可以吸走培养基后用 PBS 润洗；润洗不能清除的可以消化细胞重新接种 ,消化完成后加完全培养基终止消化 , 混匀细胞 , 收集细胞悬液 900-1000rpm( 约 150g) 离心 3min , 弃上清 . 再加 5ml PBS 重悬细胞 ,再离心后 ,用完全培养基重悬接种到新的培养皿.第二次 PBS 重悬是为了去除碎片 ,如果平时碎片比较少 ,传代时可以省略 PBS 重悬的步骤；如果碎片很多 ,建议 PBS 多洗几次.

4. 不同品牌胰酶溶液成分不一样 ,消化活性差别比较大 ,更换胰酶品牌时需重新摸索消化时间 ,以消化到细胞间隙变大但未漂浮为准 ,此时结束消化最佳 ,避免消化过度导致细胞死亡.细胞消化后比较脆弱 ,吹打力度不要过大 ,不要产生过多气泡 , 否则会严重影响细胞状态.

5. 细胞生长偏慢时 ,可以提高 5-10%血清浓度（血清总浓度不超过 20%）培养一段时间 ,待细胞状态和生长速度恢复正常后换回正常血清浓度.

售后规定

1. 细胞运输途中遭遇的各种问题 ,细胞丢失瓶身破损培养液严重漏液等 ,重发. 细胞污染问题 ,请在收到产品 3 天内 ,给我们提出真实的实验结果 ,核实后重发. 细胞收到当天以及第 2,3 天请拍照 ,3 天内未告知的 ,视为产品合格.4-7 天内出现问题提供收到细胞前 3 天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的 ,并跟技术人员沟通的, 由技术人员判定为我方责任的 ,重发.技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的 50%收费重发.

2. 客户操作造成细胞污染 ,不重发；客户严重操作失误致细胞状态不好 ,不重发；非我司推荐细胞培养体系致的细胞状态不好 ,不重发；细胞状态不好 ,未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片 ,不重发；细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的,不重发；收到细胞并发现问题与客服人员沟通的时间证明大于 7 天的, 不重发；细胞出现问题后 ,未能及时反馈并提交细胞质量问题反馈表的 ,不能免费重发 ,如需重发, 客户需与公司销售人员协商经双方定价后给予重发.原代细胞的重发没有库存的 ,须经技术人员同意后 ,定下货期再通知客户.