人淋巴管内皮细胞永生化说明书
| 货号 Cat No. | JW-Y068 |
| 规格 specifications | 5 x 10^5 cells/vial |
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描述 Description | 人淋巴管内皮细胞分离自淋巴管 ；淋巴管由毛细淋巴管汇合而成 ,其形态结构与静脉相似 ,但管径较细 ,管 壁较薄.淋巴管根据其位置分为浅 深二种. 它们管位于皮下 ,常与浅静脉伴行 ,收集皮肤和皮下组织的淋 巴.淋巴管在向心行程中 ,通常经过一个或多个淋巴结 ,从而把淋巴细胞带入淋巴液.淋巴系统对于维持人 体内环境的稳定 ,引流组织间隙的体液 ,免疫功能的发挥具有重要的意义 ,这些功能的发挥与淋巴管内皮细 胞的功能密切相关.同时在炎症及肿瘤过程中 ,淋巴管生成参与了组织的修复及肿瘤的转移. |
| 分离方法及质量控制 methods and quality control | 本公司生产的人淋巴管内皮细胞永生化通过慢病毒转染方式携带 SV40 基因制备而来 ,细胞总量约为 5 × 105 个/瓶 ,细胞经 VEGFR3 免疫荧光鉴定 ,细胞纯度可达 85%以上 ,且不含有 HIV-1 HBV HCV 支原体 细菌 酵母和真菌等. |
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培养试剂及培养条件 Culture Medium and reagents | 细胞专用培养基组分：基础培养基；胎牛血清；细胞生长因子；青霉素/链霉素溶液 （备注：每种组分单独包装,使用前需要按比例分装,详细操作详见说明书,现用现配,效果更佳.） 推荐专用培养基货号：JW-PCM-H-160 0.05%消化液货号：JW-CSP048 无血清细胞冻存液：JW-CSP077
温度 ：37℃ 气相 ：95%空气 ,5%二氧化碳 |
| 培养特性 Culture Properties | 贴壁 |
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细胞复苏 Cell Thawing | 注意:1.低温保存的细胞非常脆弱 ,请将冻存管放入 37℃的水浴中解冻 ,尽快复苏细胞. 2.提前室温预热培养基. 1.在无菌区准备好 15ml 离心管和 T-25 培养瓶并分别加入 5ml 完全培养基 ； 2.将冻存管放入 37℃水浴锅中 ,握住冻存管不停晃动 ,直到内容物完全融化.然后立即将冻存管从水浴中取 出 ,擦干并喷洒 75%乙醇 ,移至无菌区 ； 3.小心地拆卸盖子 ,不要碰到里面的螺纹 ,用移液枪轻轻吸出细胞悬液 ,加入到准备好的 15ml 离心管中 , 1000rpm 离心 5min ； 4.弃上清后 ,轻弹离心管底部分散细胞沉淀 ,加入适量完全培养基重悬细胞后转入准备好的 T25 培养瓶（建 议加液量 ：5~7ml ）； 5.轻轻摇动培养瓶使细胞均匀分布 ,如有必要（如使用不透气瓶） ,松开阀盖 ,以便气体交换. 6.将培养瓶放入 CO2 培养箱中培养. |
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细胞传代 Subculturing | 收到细胞后 ,请对细胞培养瓶外表进行消毒 ,将细胞置于培养箱中进行 1-2 小时的缓冲 ,待细胞恢复基本生 长状态后 ,进行后续细胞实验. 在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况 ： （ 一）细胞未长至 85%时 ,用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到生物操作台内 ,严格无菌操作 ,打开细胞培 养瓶 ,若培养瓶上无特殊标注 ,吸去剩余培养液 ,只留 6-8ml 培养液继续培养. （ 二 ）细胞已长满（达 85-95% ）.即可进行传代 ,具体步骤如下 ： 1.弃去培养液 ,用 PBS 洗涤 1-2 次 ； 2. 加入 1.0ml 胰酶消化液 ,37℃消化(消化时间根据不同细胞及所用胰酶有所差异) ,显微镜下观察细胞消化 |
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| 情况,若细胞回缩变圆 透亮 轻拍甁壁呈流沙样脱落,则迅速拿回操作台,加入至少双倍的完全培养液, 终止消化并轻轻吹打细胞 1-2 次,使其变成单细胞悬液； 3.将细胞收集于离心管中离心 1000rmp/5min,弃上清,轻弹管底,将细胞弹散； 4.加入新鲜培养基重悬细胞,进行传代； 5.如果没有特别说明,建议收到细胞后的第一次传代比例为 1:2. 注 ：1.观察细胞密度最好用（4X 物镜）低倍镜观察,以便正确的判断细胞密度；观察细胞形态请用（10X 或 20X）高倍镜观察； 2. 推荐使用 0.05%胰酶/EDTA 消化液（推荐货号：JW-CSP048 ）; 3. 瓶中运输的培养液不能重复使用,请换新鲜培养液培养； 4.有些细胞贴壁不牢,如发现贴壁细胞有脱落,可离心重悬后接种到新瓶内. |
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细胞冻存 Cell cryopreservation | 1. 常规方法收集对数期的贴壁细胞或悬浮细胞于试管中. 2. 根据培养细胞的密度和冻存管的大小确定所需冻存细胞数. 3. 将所需数目的细胞悬浮液置于离心管中,1000rmp,5 分钟离心收集培养细胞沉淀,彻底弃去离心管中 的上清液. 4. 加入适量的细胞冻存液于离心管中,使细胞浓度约为 5×105-1×107 /ml.轻柔地混匀细胞,制成细胞混 合液. 5. 将离心管中的细胞混合液分装于已标记的冻存管中,建议每管 1ml 或 1.5ml. 6. 直接将分装好的细胞冻存管放入-80℃超低温冰箱中,可长期冷冻保存. 7. 如果想液氮中长期保存,需先放入-80℃冰箱至少一天时间,方可移至液氮罐中保存. 8. 以上冻存步骤是按照无血清冻存液（货号：JW-CSP077 ）推荐. |
| 保存 Storage | 保存条件 ：液氮长期存储 |
| 供应限制 Product Use | 仅限科研 ,不可用于临床 |
| 安全性 Safety | 所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性 ,必须在二级生物安全台内操作 ,并请注意防护 |
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常见问题及解决方案 Questions and solutions | 1.在收到细胞后先观察培养瓶是否破裂 ,漏液等 ,如遇到上述问题请及时拍照并与我们联系. 2.贴壁细胞 ：培养瓶不开封 ,显微镜下检查细胞状态 ,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱.1-2 小时后观察 , 如细胞大部分又贴回瓶底 ,表明细胞活力正常 ,剩余少量漂浮的细胞可以去掉 ,留 8-10ml 培养液培养观察 , 细胞生长至汇合度到达 85%左右 ,进行消化传代 ；如细胞仍不贴壁 ,将细胞离心收集转到新培养瓶 ,原培养 瓶加部分培养液继续培养 ,注意观察.如细胞仍不能贴壁 ,请用台盼蓝染色鉴定细胞活力 ,并请及时拍照（多 倍数多视野） ,包括染色照片 ,并联系我们.（以上仅为贴壁细胞处理方法） 3.悬浮细胞 ：培养瓶不开封 ,显微镜下检查细胞状态 ,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱.1-2 小时后观察 , 将整瓶细胞及培养液分批离心（ 1000rmp, 5min ）,加入适量培养基 ,根据离心后的细胞量进行放回培养或 分瓶培养.（以上仅为悬浮细胞处理方法） 4.半悬细胞 ：培养瓶不开封 ,显微镜下检查细胞状态 ,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱.1-2 小时后观察 , 将整瓶细胞培养液上层悬浮细胞离心（ 1000rmp, 5min ）,重悬细胞后加入原培养瓶培养至传代.细胞数量 较大 ,可将贴壁细胞消化下来 ,与上层悬浮细胞混匀传代.重悬上层悬浮细胞时必须保持下层贴壁细胞的营 养条件 ,防止贴壁细胞缺乏营养.（以上仅为半悬细胞处理方法） 如遇到细胞培养问题请及时拍照并与我们联系 ,我们的技术人员会一直跟踪指导. |
| 备注 additional information | 由于实验所用试剂 操作环境及操作手法的不同,以上方法仅供各实验室参考. 原代细胞体外培养周期非常有限,请尽快及时安排实验. 建议配套的专用细胞培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态. |
