在做ELISA试剂盒实验过程中,难免会遇到各种不同的问题,比如标准曲线不好,试剂盒的回收率,假阴性,假阳性,实验的重复性不好等等.ELISA试剂盒现在就来一一解答用户们在实验过程中遇到的各种疑问！

 

ELISA试剂盒曲线问题： 

1.OD值不正常

可能原因1：试剂盒未回温,试剂盒回温到25℃

可能原因2：温度控制不好,控制正确温度

可能原因3：孵育时间不准确,控制孵育时间

可能原因4：洗涤时冲击力太大 浸泡时间过长 洗涤次数增 加,洗涤4-5次,每孔250ul,然后拍干

可能原因5：阳光直射,对着风直接吹,避风

可能原因6：酶标仪的波长错误,酶标仪的波长450nm

可能原因7：抗体的稀释错误,正确的稀释抗体

可能原因8：水质问题,用娃哈哈矿泉水代替

 

2.白   板

可能原因1：洗涤液配制错误,正确的配制洗涤液

可能原因2：少加液体（错加液体）,正确的步骤加液体

 

3.无 梯 度

可能原因1：标准品也污染,换标准品点板

可能原因2：OD值不正常,控制温度时间在做一次

可能原因3：人为点板,不要点板

 

4.线 性 不 好

可能原因：OD值不正常,控制温度时间在做一次

 

ELISA试剂盒回收率

1.空白管阳性高

可能原因1：样本本身就是阳性样本,换阴性样本做回收率

可能原因2：空白管在实验中被污染,实验中防止交叉污染

可能原因3：水质原因用,娃哈哈矿泉水代替

 

2.偏  高

可能原因1：添加量不准确,精准的添加量

可能原因2：添加浓度不适合,ELISA试剂盒添加合适的浓度

可能原因3：取液吹干量多,准确的取液吹干

可能原因4：取到其它相层液体,取需用相吹干

可能原因5：复溶液未稀释或加入量少,正确的稀释复溶液

 

3.偏  低

可能原因1：添加量不准确,精准的添加量

可能原因2：添加浓度不适合,添加合适的浓度

可能原因3：取液吹干量少,准确的取液吹干

可能原因4：复溶液稀释错误或加入量多,正确的稀释复溶液

 

4.假阴 阳性

可能原因1：水质原因：点复溶液验证,用娃哈哈矿泉水代替

可能原因2：实验操作原因

可能原因3：吸取到其它相吹干,准确的取液吹干

可能原因4：离心不彻底,延长离心时间

可能原因5：样本的污染,更换样本

可能原因6：乳化未处理完全,温浴（70℃）处理乳化现象

 

5.仪器试剂原因

可能原因1：离心管未清洗干净,正确的洗涤器具

可能原因2：有机溶剂的影响,ELISA试剂盒做试剂空白看影响结果

6.衍生化试剂原因（长时间衍生化试剂变质）,更换衍生化试剂

7.与曲线好坏相关,,保证曲线的正常

只有找好对应的原因,才能更好的进行实验,以上原因可以逐渐排除,在实验操作过程中,尽量按照说明书来操作！有任何问题也可以随时咨询极威生物科技有限公司.