本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断
人1,25-二羟基维生素D3（1,25(OH)2D3）ELISA检测试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）.往预先包被人1,25-二羟基维生素D3（1,25(OH)2D3）捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本 标准品 HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤.用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的人1,25-二羟基维生素D3（1,25(OH)2D3）呈正相关.用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值）,计算样品浓度.
样品收集 处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离.
2. 血浆：EDTA 柠檬酸盐或肝素抗凝.3000转离心30分钟取上清.
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物.
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎.3000转离心10分钟取上清.
5. 保存：如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻.
自备物品
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL 2-20uL 20-200uL 200-1000uL
3. 37℃恒温箱
操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟.从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用.
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封（低温干燥）保存.
3. 预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可.
4. 严格按照说明书中标明的时间 加液量及顺序进行温育操作.
5. 所有液体组分使用前充分摇匀.
试剂盒组成
| 名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
| 微孔酶标板 | 12孔×8条 | 12孔×4条 | 无 |
| 标准品 | 0.3mL | 0.3mL | 无 |
| 样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
| 20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 无 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 无 |
| 终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
| 说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
| 自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
注：标准品浓度依次为：48 24 12 6 3 0 ng/mL.
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水.
洗板方法
1. 手工洗板：甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次.
2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次.
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃.
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3. 待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL；
4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min.
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）.
6. 每孔加入底物A B各50μL,37℃避光孵育15min.
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值.
尊敬的客户：
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