本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断

人促胰液素（secretin）ELISA检测试剂盒

使用说明书

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）.往预先包被人促胰液素（secretin）捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本 标准品 HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤.用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的人促胰液素（secretin）呈正相关.用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值）,计算样品浓度.

样品收集 处理及保存方法

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离.

2.  血浆：EDTA 柠檬酸盐或肝素抗凝.3000转离心30分钟取上清.

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物.

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎.3000转离心10分钟取上清.

5.  保存：如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻.

自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL 2-20uL 20-200uL 200-1000uL

3. 37℃恒温箱

操作注意事项

1.  试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟.从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用.

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封（低温干燥）保存.

3.  预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可.

4.  严格按照说明书中标明的时间 加液量及顺序进行温育操作.

5.  所有液体组分使用前充分摇匀.

试剂盒组成

名称	96孔配置	48孔配置	备注
微孔酶标板	12孔×8条	12孔×4条	无
标准品	0.3mL	0.3mL	无
样本稀释液	6mL	3mL	无
检测抗体-HRP	10mL	5mL	无
20×洗涤缓冲液	25mL	15mL	按说明书进行稀释
底物A	6mL	3mL	无
底物B	6mL	3mL	无
终止液	6mL	3mL	无
封板膜	2张	2张	无
说明书	1份	1份	无
自封袋	1个	1个	无

注：标准品浓度依次为：200 100 50 25 12.5 0 pg/mL.

试剂的准备

 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水.

洗板方法

1.  手工洗板：甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次.

2.  自动洗板机：每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次.

操作步骤

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃.

2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.  待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL；

4.  随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min.

5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）.

6.  每孔加入底物A B各50μL,37℃避光孵育15min.

7.  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值.

结果判断

 绘制标准曲线：在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值. 

试剂盒性能

1.  准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900.

2.  灵敏度：最低检测浓度小于1.0 pg/mL.

3.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应.

4.  重复性：板内变异系数小于10% 板间变异系数小于15%.

5.  贮藏：2-8℃,避光防潮保存.

6.  有效期：6个月

免责声明

1.   试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责.

2.   严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担.