主要用途
全组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂是一种旨在以X-Gal为底物,通过组织内β-半乳糖苷酶在酸性条件下稳定表达,催化生成深蓝色的沉积产物,从而在光学显微镜下观察到蓝色表达的组织细胞分布,作为细胞复制性衰老(replicative senescence)的分子特征来识别和探测衰老组织的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。广泛应用于细胞生物学研究。其适用于各种人体和动物活体(in vivo)检测。产品即到即用,性能稳定,参数优化,着色敏感。
技术背景
细胞复制性衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制。衰老细胞停滞在细胞周期的G1期,表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的形态特征,尤其在酸性条件下,细胞内β-半乳糖苷酶活性增加,而成为细胞衰老的生物学标记。全组织(WHOLE MOUNT或EN BLOC)原位染色第一时间真实反应转染效果,组织形态维持良好,同时后续使用石蜡切片存档保存成为可能。
产品内容
清理液(Reagent A) 毫升
固定液(Reagent B) 毫升
酸性液(Reagent C) 毫升
稀释液(Reagent D) 毫升
染色液(Reagent E) 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存染色液(Reagent E)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;稀释液(Reagent D)和染色液(Reagent E),用铝箔封裹,避免光照;有效保证6月
用户自备
15毫升锥形离心管:用于配制染色工作液
恒温培养箱:用于染色孵育
切片仪:用于石蜡或冰冻切片
光学显微镜:观察染色后的组织细胞
实验步骤
实验开始前,将试剂盒里的染色液(Reagent E)从-20℃的冰箱里取出,置入冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液(Reagent D)到15毫升离心管,加入xx微升染色液(Reagent E),混匀后,置入暗室里,室温下,标记为染色工作液。然后进行下列操作:
1. 准备1个6孔细胞培养板
2. 放进新鲜切除的动物组织样本(注意:建议组织大小为0.5厘米厚,1厘米长;如果过大,最好刀切处理一下)
3. 将组织压平
4. 小心加入xx毫升清理液(Reagent A),清洗组织样本
5. 小心抽去清理液
6. 小心加入xx毫升固定液(Reagent B),浸没整个组织
7. 在4℃条件下孵育2小时
8. 小心抽去固定液
9. 小心加入xx毫升酸性液(Reagent C),清洗组织样本
10. 在室温下孵育15分钟
11. 小心抽去净化液
12. 重复实验步骤9至11一次
13. 小心加入xx毫升染色工作液,浸没整个组织
14. 放进37℃培养箱,孵育16小时,避免光照
15. 后续石蜡切片(6微米厚)或冰冻切片(10微米厚)
16. 在光学显微镜下观察和计数:表达β- 半乳糖苷酶活性的组织为阳性,呈现蓝色
注意事项
1. 本产品为10次(10个样本)操作
2. 操作时须戴手套
3. 使用时,避免污染母液,否则出现絮状沉淀,影响实验效果
4. 原始组织大小可以1厘米厚、2厘米长进行染色,但建议越小越佳
5. 本产品的参数:固着剂种类和浓度、pH、生色底物的选择和浓度等达到最优化
6. 染色工作液避免光照
7. 用户根据实际需求,按比例配制试剂用量
8. 染色孵育过程,避免光照
9. 组织β-半乳糖苷酶活性强,孵育3小时即显示阳性;组织β-半乳糖苷酶活性弱,则需要孵育24小时
10. 组织染色最长孵育时间为24小时
11. 本产品染色敏感,甚至对于微弱表达的酶活性仍然显色清晰;用户可以根据实际情况调整孵育时间和染色工作液浓度,使染色恰到好处
12. 孵育时避免液体蒸发
13. 组织呈现蓝色的部位为衰老组织特异性β-半乳糖苷酶活性的地方
14. 全组织染色存在其染色不均匀、组织内部染色渗透困难等局限
15. 染色后的后续处理的切片样品可以长期保存,同样须避免光照
16. 本公司提供系列细胞衰老分析试剂产品
质量标准
1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定着色清晰
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK, RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10012.2 全组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒 10次
G&VS10012.2A 清理液(Reagent A) 毫升
G&VS10012.2B 固定液(Reagent B) 毫升
G&VS10012.2C 酸性液(Reagent C) 毫升
G&VS10012.2D 稀释液(Reagent D) 毫升
G&VS10012.2E 染色液(Reagent E) 毫升
试剂盒订购信息
产品编号 | 名称 | 规格 |
G&VS10012.1 | 细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒 | 100/250次 |
G&VS10012.2 | 全组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒 | 10次 |
G&VS10012.3 | 冰冻切片组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒 | 50次 |
G&VS10012.4 | 通用型组织细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒 | 10/100次 |
G&VS80056.1 | 细胞衰老特异性脂褐素原位染色试剂盒 | 50次 |
G&VS80056.2 | 全组织衰老特异性脂褐素原位染色试剂盒 | 10次 |
G&VS80056.3 | 冰冻切片组织衰老特异性脂褐素原位染色试剂盒 | 50次 |
G&VS80056.4 | 石蜡切片组织衰老特异性脂褐素原位染色试剂盒 | 50次 |
G&VS10037.1 | 细胞β-半乳糖苷酶化学发光法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS10037.2 | 细胞β-半乳糖苷酶比色法定量检测试剂盒 | 20次 |