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通用型细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒产品说明书

点击次数:58次     发布时间:2024/11/13 14:35:05

主要用途

通用型细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂是一种旨在X-Gal为底物,通过组织/细胞内β-半乳糖苷酶在酸性条件下稳定表达,催化生成深蓝色的沉积产物,从而在光学显微镜下观察到蓝色表达的细胞作为细胞复制性衰老replicative senescence)的分子特征来识别和探测衰老细胞的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。广泛应用于细胞生物学研究。其适用于各种人体和动物细胞、活体组织以及冰冻组织切片检测。产品即到即用,性能稳定,参数优化,着色敏感。

技术背景

细胞复制性衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制。衰老细胞停滞在细胞周期的G1期,表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的形态特征,尤其在酸性条件下,细胞内β-半乳糖苷酶活性增加,而成为细胞衰老的生物学标记。

产品内容

清理液(Reagent A)         毫升

固定液(Reagent B          毫升

酸性液(Reagent C         毫升

稀释液(Reagent D         毫升

染色液(Reagent E         毫升

产品说明书                 x1

保存方式

保存染色液(Reagent E)在-20℃冰箱里其余的保存在4℃冰箱里;稀释液(Reagent D)和染色液(Reagent E)用铝箔封裹,避免光照;有效保证6

用户自备

2毫升离心管:用于配制染色工作液

15毫升锥形离心管:用于配制染色工作液

恒温培养箱:用于染色孵育

切片仪:用于石蜡或冰冻切片

光学显微镜:用于观察染色后的细胞

实验步骤

一、 细胞染色

操作一、25cm2细胞培养瓶染色

实验开始前,将试剂盒里的染色液(Reagent E从-20的冰箱里取出,放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液(Reagent D2毫升离心管,加入xx微升染色液(Reagent E,混匀后,放进37℃恒温水槽里预热,标记为染色工作液。然后进行下列操作:

1. 小心抽去25cm2细胞培养瓶里的培养液

2. 小心加入xx毫升清理液(Reagent A,清洗生长中的细胞表面

3. 小心抽去清理液

4. 小心加入xx毫升固定液(Reagent B,覆盖整个生长表面

5. 在室温下孵育5分钟

6. 小心抽去固定液

7. 小心加入xx毫升酸性液(Reagent C,清洗细胞表面

8. 小心抽去酸性液

9. 重复实验步骤78两次

10. 小心加入xx毫升预热的染色工作液,覆盖整个细胞表面

11. 放进37培养箱,孵育3小时至16小时,或细胞呈现蓝色(注意:避免液体蒸发

12. 在光学显微镜下观察和计数:表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶的细胞为阳性细胞,呈现蓝色

操作二、24孔细胞培养板染色

实验开始前,将试剂盒里的染色液(Reagent E从-20的冰箱里取出,放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液(Reagent D15毫升锥形离心管,加入xx微升染色液(Reagent E,混匀后,放进37℃恒温水槽里预热,标记为染色工作液。然后进行下列操作:

1.小心抽去24孔细胞培养板里的培养液

2.每孔加入xx微升清理液(Reagent A,清洗生长中的细胞表面

3.小心抽去每孔里的清理液

4.每孔加入xx微升固定液(Reagent B,覆盖整个生长表面

5.在室温下孵育5分钟

6.小心抽去固定液

7.每孔加入xx微升酸性液(Reagent C,清洗细胞表面

8.小心抽去酸性液

9.重复实验步骤78一次

10.每孔加入xx微升预热的染色工作液,覆盖整个细胞表面

11.放进37培养箱,孵育3小时至16小时,或细胞呈现蓝色(注意:避免液体蒸发

12.在光学显微镜下观察和计数:表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶的细胞为阳性细胞,呈现蓝色

二、 冰冻切片染色

实验开始前,将试剂盒里的染色液(Reagent E从-20的冰箱里取出,放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液(Reagent D15毫升锥形离心管,加入xx微升染色液(Reagent E,混匀后,放进37℃恒温水槽里预热,标记为染色工作液。然后进行下列操作:

1. 准备10片待测的厚为510微米的冰冻切片

2. 置于室温下,小心加上xx微升预冷的清理液(Reagent A,铺满整个切片表面

3. 小心移去切片上的清理液(Reagent A

4. 小心加上xx微升预冷的固着液(Reagent B,铺满整个样品表面

5. 室温下孵育10分钟

6. 小心移去切片上的固着液(Reagent B

7. 小心加上xx微升酸性液(Reagent C,铺满整个切片表面

8. 室温下孵育5分钟

9. 小心移去切片上的酸性液(Reagent C

10. 重复实验步骤79二次

11. 小心加上xx微升预热的染色工作液,铺满整个切片表面

12. 37℃湿润培养箱里,孵育324小时,或组织细胞呈现蓝色(注意:避免液体蒸发

13.小心移去切片上的染色工作液

14.小心加上xx微升清理液(Reagent A,铺满整个切片表面

15.小心移去切片上的清理液(Reagent A

16.放上盖玻片或封片

17.即刻在光学显微镜下观察和计数:表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶活性的地方,呈现蓝色

三、 全组织染色

实验开始前,将试剂盒里的染色液(Reagent E从-20的冰箱里取出,放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液(Reagent D15毫升离心管,加入xx微升染色液(Reagent E,混匀后,放进暗室里,室温下,标记为染色工作液。然后进行下列操作:

1. 准备16孔细胞培养板

2. 放进新鲜切除的动物组织样本(注意:建议组织大小为0.5厘米厚,1厘米长;如果过大,最好刀切处理一下

3. 将组织压平

4. 小心加入xx毫升清理液(Reagent A,清洗组织样本

5. 小心抽去清理液

6. 小心加入xx毫升固定液(Reagent B,浸没整个组织

7. 4℃条件下孵育2小时

8. 小心抽去固定液

9. 小心加入xx毫升酸性液(Reagent C,清洗组织样本

10. 在室温下孵育15分钟

11. 小心抽去净化液

12. 重复实验步骤911一次

13. 小心加入xx毫升染色工作液,浸没整个组织

14. 放进37培养箱,孵育16小时,避免光照

15. 后续石蜡切片(6微米厚)或冰冻切片(10微米厚)

16. 在光学显微镜下观察和计数:表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶活性的组织细胞为阳性细胞,呈现蓝色

注意事项

1. 本产品为100次(424孔板和冰冻切片)、20次(2025cm2细胞培养瓶)或10次(全组织)操作

2. 操作时,须戴手套

3. 本产品的参数:固着剂种类和浓度、pH、生色底物的选择和浓度等达到最优化

4. 使用时,避免污染母液,否则出现絮状沉淀,影响实验效果

5. 染色工作液避免光照

6. 原始组织大小可以1厘米厚、2厘米长进行染色,但建议越小越佳

7. 用户根据实际需求,按比例配制试剂用量

8. 细胞β-半乳糖苷酶活性强,孵育3小时即显示阳性;细胞β-半乳糖苷酶活性弱,则需要孵育24小时

9. 细胞染色最长孵育时间为24小时

10. 本产品染色敏感,尤其对于微弱酶活性仍然可以检测,用户可以根据情况调整染色时间和染色工作液浓度,使染色恰到好处

11. 孵育时避免液体蒸发

12. 细胞呈现蓝色的部位为衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶活性的地方

13. 全组织染色存在其染色不均匀、组织内部染色渗透困难等局限

14. 染色后的细胞样品可以在4冰箱里长期保存,同样须避免光照

15. 本产品适合各种规格的培养细胞:载玻片,载玻片培养皿,35mm培养皿,和各种培养孔板,须相应调整处理液:

操作容器

建议处理液规格

载玻片

100微升

载玻片培养皿

1毫升

35mm培养皿

1毫升

96孔培养板

100微升

48孔培养板

200微升

24孔培养板

500微升

12孔培养板

1毫升

6孔培养板

2毫升

25cm2细胞培养瓶

3毫升

 16. 本公司提供系列细胞衰老分析试剂产品

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定

2. 本产品经鉴定着色敏感

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着信誉至上、客户满意、质量承诺的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORKRECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG

订购信息

单组分订购信息

编号                      名称                         规格

G&VS10012.4    通用型细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒   10/100

G&VS10012.4A    清理液(Reagent A)                       毫升

G&VS10012.4B    固定液(Reagent B                       毫升

G&VS10012.4C    酸性液(Reagent C                           毫升

G&VS10012.4D    稀释液(Reagent D                        毫升

G&VS10012.4E    染色液(Reagent E                         毫升

试剂盒订购信息

产品编号

名称

规格

G&VS10012.1

细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒

100/250

G&VS10012.2

全组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒

10

G&VS10012.3

冰冻切片组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒

50

G&VS10012.4

通用型组织细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒

10/100

G&VS80056.1

细胞衰老特异性脂褐素原位染色试剂盒

50

G&VS80056.2

全组织衰老特异性脂褐素原位染色试剂盒

10

G&VS80056.3

冰冻切片组织衰老特异性脂褐素原位染色试剂盒

50

G&VS80056.4

石蜡切片组织衰老特异性脂褐素原位染色试剂盒

50

G&VS10037.1

细胞β-半乳糖苷酶化学发光法定量检测试剂盒

20

G&VS10037.2

细胞β-半乳糖苷酶比色法定量检测试剂盒

20

 

TEL:021-80186165  点击拨打热线