CAT#:JW-4-130601
常温运输和保存

产品及特点
AgNOR是核仁组织区（Nucleolar Organizer Region，NOS）嗜银蛋白，不属于组织蛋白，与核糖体的形成和细胞内蛋白质的合成关系密切，所以AgNOR可用来反映核仁结构和功能的改变，对鉴别良、恶性肿瘤有重要价值。本产品就是专门用于AgNOR染色的产品，它具有下列特点：
1.一站式，含有所需主要试剂，不需要单独准备。
2.显色后AgNOR呈棕黑色颗粒。
3.本产品适用于石蜡包埋切片，冰冻切片和涂片的染色。
4.本试剂盒可以用于至少250次切片显色。
5.本产品仅限于科研使用，不能用于临床。

规格及成分
本产品采用大纸盒包装
成份                                    编号             规格                包装
AgNOR染色试剂成分1    4-130601a        2g                5 mL本色瓶
AgNOR染色试剂成分2    4-130601b       1mL               2 mL本色管
AgNOR染色试剂成分3    4-130601c        100g             60 mL棕色瓶
使用手册                        4-130601sc        1份                无

运输及保存
常温运输和保存，保存期一年。

自备试剂
双蒸馏水、无水乙醇、醋酸（对涂片）

使用方法
一、配制工作液
配制AgNOR染色工作液：以90mL为例，其他体积请按比例增减各成分。本工作液只能新鲜配制，没有完的不能再用。
1.配制A液：在装2g AgNOR染色试剂成分1的瓶子中加入99mL双蒸馏水，60℃水浴搅拌至溶，冷却后再加入1mL AgNOR染色试剂成分2并摇晃均匀。此为A液，没用完的需要-20℃保存。
2.配制B液：在干净的300-500mL玻璃烧杯中加入100mL双蒸馏水，加入AgNOR染色试剂成分3（保留棕色塑料瓶），搅拌溶解，定容到200mL，最后倒回保留的250mL棕色塑料瓶中。此为B液，没用完的需要-20℃避光保存
3.配制AgNOR染色工作液：临用时将A液和B液按1：2的体积比例加入到染缸中混匀即可。必须现配现用。为了减少误差，最好提前将A液、B液和染缸放25℃预热，这样使用时现配得到的工作液就直接是25℃。

二、染色步骤
4.对石蜡切片：连续石蜡切片厚3μm，脱蜡至水。双蒸馏水浸洗2次。
5.对冰冻切片：恒冷箱切片机对新鲜的手术标本或冷冻的保存标本,进行切片，厚度为6~8μm，在空气中风干或经冷风吹干，然后用无水乙醇快速固定 3~5min。切片放干后，经95%、85%、75%乙醇各2min，再用双蒸馏水洗2min。
6.对涂片：将新鲜标本切开后用清洁干燥的载玻片或盖玻片印取标本得到涂片，待自然干燥或冷风吹干后，用自备的乙醇-醋酸(3:1)混合液固定5min，空气中放干，再入95%、80%、75%乙醇中各2min至水洗,双蒸馏水洗2次。
7.在暗处将切片放入在25℃预热的染缸中的AgNOR染色工作液中，第20min后要不断地在显微镜下观察，一旦发现着色就立即进入下一步反应，否则可出现背景较深，甚至出现AgNOR颗粒融合现象。由于AgNOR反应的染色时间与温度有关，温度高时间就短，温度低时间就长，很难标准化，所以强烈建议此步在25℃恒温箱中进行。
8.双蒸水中浸洗3次。
9.用无水乙醇浸洗2次脱水。
10.用二甲苯：石炭酸(4∶1)混合液处理1 min，然后二甲苯透明和中性树胶封固。本染色试剂盒不提供本步所需的相关试剂。

三、染色结果的显微镜观察
11.AgNOR的计数方法：在计数时，只计算核内的、分散的小黑点数或连接成串珠状或不规则形的小黑点数。银染核仁(AgNu) 若不能看清其中的细小黑点，则可算作一点。若能看清其内的细小黑点时,则计数小黑点的数。
12.AgNOR的结果需要用100X油镜观察。细胞核及胞质背景为淡黄色，AgNOR呈棕黑色颗粒状。有的为黑色细小点状，分散于整个核仁之中；稍大的颗粒，黑色圆形；也有的可见许多细小颗粒集合或融合成不规则团块状。

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