CAT#:6-0514
常温运输，4-25℃保存

产品及特点
成分                                      含量
乙酸钾(1M，pH7.0)            10mL/L
氯化钙-2H20                       11.8g/L
氯化锰-2.4H20                    4.0g/L
氯化镁                                2.0g/L
甘油                                  100mL/L
本产品是含乙酸钾、氯化钙、氯化锰、氯化镁和甘油的混合缓冲液，可以用于制备大肠杆菌感受态细胞。其成分表如下：

规格及成分
本产品使用塑料袋包装
成分                                编号            规格                    包装
CCMB80转化缓冲液    6-0514            250 mL            250 mL本色瓶
使用手册                       6-0514sc            1份            无

运输及保存
常温运输，4-25℃，有效期一年。

自备试剂
SOB液体培养基，无菌离心管（尺寸根据离心机决定，离心菌液用），1.5mL无菌离心管（分装感受态细胞用）

操作流程
1.预培养大肠杆菌：接种单个新鲜大肠杆菌菌落到SOB液体培养基中，18-22℃振荡培养12-18小时至饱和，饱和时菌液的OD≈3.5。
2.大规模培养：将相当于终体积0.2%的上步得到的饱和菌液加入到SOB液体培养基中（如果是100mL SOB液体培养基则加入0.2mL饱和菌液），此时OD600≈0.01。放18-22℃振荡培养，摇瓶速度为250rpm。从第8小时开始定期监测OD，当OD600=0.2-0.26时立即进入下一步。在培养细菌期间，将离心机和离心管放4℃预冷待用。将本产品放冰上预冷待用。
3.将细菌转移到预冷的离心管中，1000g离心15分钟。此步可以分多管离心。此时离心机可以放在室温，因为它的温度不会马上变回室温。
4.小心吸弃液体培养基，不要触及细菌沉淀。
5.将细菌重悬于1/3培养液体积的冷冻本产品中（如果是100mL菌液，则此处用33mL本产品）。如果是分多管操作，需要重悬后汇集。
6.将重悬液放冰上孵育20分钟。
7.1000g离心15分钟。小心吸弃液体培养基，不要触及细菌沉淀。
8.通过轻柔旋转将细胞重悬于1/25体积的预冷的本产品中（如果是100mL菌液，则此处用4mL本产品）
9.在4℃冷藏室或在冰上将制备的感受态细胞分装到预冷的无菌离心管中，体积根据每次转化需要的量决定，一般是50-100uL。
10.快速将装有感受态细胞的离心管从4℃转移到的-80℃冰箱中长期保存。如果需要立即使用，则直接在4℃进行转化。
11.转化过程按常规流程进行。

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