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大肠杆菌BL21(DE3)菌种说明书

点击次数:24次     发布时间:2024/10/28 9:26:29

CAT#:JW-2-0025

低温运输,-80℃保存

产品及特点

本菌株来源于B系大肠杆菌而不是K-12大肠杆菌,但有数个基因是从E.coli K-12转导而来。它是广泛用于蛋白表达用宿主菌。本菌株具有下列特点:

染色体上携带由lacUV5启动子控制的T7 RNA 聚合酶基因,故在IPTG诱导下,可以高效表达T7启动子驱动的外源基因。

缺失lon和ompT两个蛋白酶基因,有利于外源蛋白的纯化。

由于有背景表达,故本菌株只适合用于非毒性蛋白的表达,不适用于毒性蛋白的表达。

本菌种不带任何抗菌素抗性。

 


基因型

大肠杆菌BL21(DE3)菌种的基因型是:B系, F-, lon-11, Δ(ompT-nfrA)885, Δ(galM-ybhJ)884, lDE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5] ,Δ46, [mal+]K-12(lS) ,hsdS10(各文献上报道的基因型稍微有所不同,此处采用美国耶鲁大学Coli Genetic Stock Center的资料)。

大肠杆菌BL21(DE3)基因型符号及其含义列表如下:

基因型符号

含义

B

B系大肠杆菌默认基因型是lon-dcm-,lon突变是lon启动子有一IS186插入突变,使ATP依赖性蛋白酶Lon缺失,提高重组蛋白产量;dcm突变使胞嘧啶甲基化酶失活,CCWGG中的第二个C不再被甲基化,可通过影响甲基化依赖的突变修复系统而提高突变率

F-

不携带F质粒

lon-11

描述见上

l(DE3[lacI lacUV5-T7 gene1 ind1 sam7 nin5])

染色体携带DE3 l原噬菌体,此片段又携带lacI、sam7I等基因和由lacUV5启动子控制的T7 RNA聚合酶基因

Δ(ompT-nfrA)885

缺失从DLP12原噬菌体到Rhs因子这段区域,包括appY、ompT、envY、ybcH和nfrA五个基因。其中ompT编码外膜蛋白酶VII,其缺失降低了蛋白降解,有利于表达蛋白纯化

Δ(galM-ybhJ)884

缺失galMKTE、modFE、acrZ、modABC、ybhA、pgl、ybhD、ybhH、ybhI和ybhJ等基因

hsdS10

EcoK系统Eco位点识别能力缺失,导致对此位点的甲基化修饰和限制功能均失

Δ46

一个恢复活性的原噬菌体,在K-12中无活性

[mal+] K-12(lS)

malK、lamB、malM来于E. coli K-12,为野生型,通过转导获得。野生型的lamB使得菌株对l噬菌体感染敏感

 

 


原始文献

Studier FW, Moffatt BA. 1986. Use of bacteriophage T7 RNA polymerase to direct selective high-level expression of cloned genes. J. Mol. Biol. 189: 113–130.

 


规格及成分

本产品使用塑料袋包装

成分

编号

规格

包装

大肠杆菌BL21(DE3) 甘油菌

2-0025

1 mL

1.5mL菌种管

使用手册

2-0025sc

1份

 

 


运输及保存

低温运输,-80℃保种保存,有效期三年。

 


使用方法

本产品可用于常规大肠杆菌感受态细胞制备、转化等实验,具体步骤请见分子克隆手册等工具书。

 


关联产品

大肠杆菌HB101菌种

 


CAT#:JW-2-0011

低温运输,-80℃保存

 


产品及特点

   本菌种是美国科学家D. Hanahan在1983年首次报道的K-12系大肠杆菌菌株,它是以DH1为基础构建的,是分子生物学中最常用的用于克隆的大肠杆菌菌株,其主要特点如下:

转化效率比DH1更高,适用于分子克隆。

脱氧核糖组成型合成,适合扩增制备高拷贝和大型质粒。

携带b-半乳糖苷酶w片段,如果外源基因携带此酶的a片段,则可以进行蓝白斑筛选重组子。

内源核酸酶EndA1缺失,提取的质粒DNA残留DNase少,质量高。

基于RecA的三套重组系统均缺失,质粒在复制过程发生重组、丢失和串环的可能性降到最低,使得插入片段稳定。

EcoK限制功能缺失(hsdR-),不能酶切在EcoK位点没有甲基化的DNA,但其修饰功能完整,故可以用EcoK位点非甲基化质粒通过本菌株制备其对应的甲基化质粒,后者可用来转化限制EcoK功能正常(基因型为hsdR+)的K-12系的大肠杆菌。

本菌株对常见抗菌素没有抗性。

 


 基因型

大肠杆菌DH5a菌种的基因型是:K-12,F-,φ80,l-,Δ(argF-lac)169, DlacZ58(M15), ΔphoA8,glnX44(AS), deoR481, rfbC1, gyrA96(NalR), recA1, endA1, thiE1, hsdR17(各文献上报道的基因型稍微有所不同,此处采用美国耶鲁大学Coli Genetic Stock Center的资料)。

大肠杆菌DH5a菌种基因型符号及其含义列表如下:

基因型符号

含义

K-12

K-12系的所有菌种默认都携带F因子和l、e14、rac三种原噬菌体。其中的e14携带野生型mcrA基因,其产物可对甲基化的CG切割。

F-

此菌株缺失F因子

l-

此菌株缺失l原噬菌体

φ80

携带φ80原噬菌体

DΔ(argF-lacZ)U169

也叫ΔlacU169,来于Hfr3000U169菌种,位于此区域的lac操纵子和过氧化氢敏感基因缺失,使细菌抗过氧化氢,实际缺失mmuP到argF和lac到mhpD的区域,实为Δ(mmuP-mphD)

rfbC1

LPS合成缺失,缺失LPS有助于提高转化效率

deoR481

deo操纵子阻遏蛋白失活,脱氧核糖组成型合成,适合扩增制备质粒

endA1

核酸内切酶I缺失

glnX44(Am)

同supE和glnV,使琥珀终止子编码谷氨酰胺,为部分噬菌体生长所需

gyrA96

DNA促旋酶失活,导致对萘啶酮酸和荧光喹啉的抗性

hsdR17

EcoK系统的限制性内切酶Eco失活,不酶切非甲基化的Eco位点

ΔlacZ58M15

原ΔlacZM15,携带来于M15菌株的、编码b-半乳糖苷酶的w片段,与编码b-半乳糖苷酶a片段的质粒互补可,恢复酶活性,用于蓝白斑筛选

recA1

ATP依赖型重组酶失活,recBCD、recE和recF三条重组路径均复丧失,重组率降低1万倍。适合扩增有回文结构的高拷贝质粒

thiE1

原thi-1,不能合成硫氨(维生素B1)

 

 


规格及成分

本产品采用塑料袋包装

成分

编号

规格

包装

大肠杆菌DH5α甘油菌

12-0011

1 mL

1.5mL菌种管

使用手册

12-0011sc

1份

 

 


原始文献

Hanahan D.1983. Studies on transformation of Escherichia coli with plasmids. J. Mol. 166:557-580.

 


运输及保存

低温运输,-80℃保种保存,有效期三年。

 


使用方法

本产品可用于常规大肠杆菌感受态细胞制备、转化等实验,具体步骤请见分子克隆手册等工具书。

 


关联产品

大肠杆菌DH1甘油菌

 



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