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大肠杆菌TOP10菌种说明书

点击次数:20次     发布时间:2024/10/28 9:22:47

CAT#:JW-2-0081

低温运输,-80℃保存

 


产品及特点

本产品为大肠杆菌TOP10甘油菌菌种,该菌种是大肠杆菌K-12系衍生菌株,主要用于克隆和质粒制备。它具有如下特点:

核酸内切酶缺陷,能够有效提升制备的质粒DNA的质量。

三条重组途径均失去活性,能够有效提高DNA插入片段的稳定性。

EcoK甲基化修饰和限制系统缺失,故可用EcoK位点甲基化和非甲基化的DNA(如PCR产物)进行转化并制备非甲基化的DNA。

McrA、McrBC和Mrr三套依赖于甲基化的限制系统缺失,可用甲基化的DNA(如基因组DNA)进行转化制备非甲基化的DNA。

如果质粒携带b-半乳糖苷酶a片段,则可用蓝白筛选法筛选重组子。

具有链霉素抗性和2-脱氧半乳糖抗性。

本产品只可用于科研。

 


 


基因型

大肠杆菌TOP10菌种的基因型是:K-12, F-,araD139, Δ(ara-leu)7697, deoR,endA1,F80lacZDM15,galU,galK,ΔlacX74,mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC), nupG,recA1,rpsL

大肠杆菌TOP10菌种基因型符号及其含义列表如下:

基因型符号

含义

K-12

K-12系的所有菌种默认都携带F因子和l、e14、rac三种原噬菌体。其中的e14携带野生型mcrA基因,其产物可对甲基化的CG切割。

F-

本菌种缺失F因子

araD139

不能代谢阿拉伯糖

△(ara-leu)7697

不能自身合成亮氨酸

deoR,

deo操纵子阻遏蛋白失活,脱氧核糖组成型合成

endA1

核酸内切酶I缺失

F80lacZDM15

F80原噬菌体上携带lacZDM15,其编码b-半乳糖苷酶基因w片段,与携带a片段的质粒互补可恢复酶活性,用于蓝白斑筛选

galU

葡萄糖-1-磷酸尿苷酰转移酶失活,不能合成半乳糖,对2-脱氧半乳糖抗性

galK

半乳糖激酶失活,不能利用半乳糖,对2脱氧半乳糖抗性

△lacX74

lac操纵子和邻近区域缺失,不能代谢乳糖

mcrA

在此菌种中,e14原噬菌体携带的mcrA基因缺失,故不能对甲基化的CG切割

△(mrr–hsdRMS-mcrBC)

缺失对甲基化C的限制、缺失EcoK修饰限制系统,缺失对甲基化A的限制

nupG

同deoR,核苷酸转运突变,使得细胞组成型合成核苷酸,用于质粒制备

recA1

ATP依赖型重组酶失活,recBCD、recE和recF三条重组路径均复丧失,重组率降低1万倍。适合扩增有回文结构的高拷贝质粒

rpsL

30S核糖体S12突变,导致对链霉素抗性

 

 


 


规格及成分

本产品使用塑料袋包装

成分

编号

规格

包装

大肠杆菌TOP10菌种

2-0081

1.0 mL

2.0 mL菌种管

使用手册

2-0081sc

1份

 

 


 


运输及保存

低温运输,-80℃保种保存,有效期一年。

 


 


自备物品

 


 


使用方法

按常规操作在固体培养皿上划线涂板,得到单克隆后再进行后续的感受态细胞制备和转化表达等操作,具体步骤请见分子克隆手册等工具书。

 


 


关联产品

E.coli大肠杆菌BL21(DE3)菌种

 


 


CAT#: JW-2-0047

低温运输,-80℃保存

 


 


产品及特点

大肠杆菌HB101是由美国科学家H. Boyer用E.coli K112系与E.coli B系菌种杂交后分离而得的菌株,其基因组的绝大部分来源于K112菌种。它能被质粒有效的转化,故常用于质粒的大量制备。它具有下列特点:

三个DNA重组途径均缺失,故DNA重组效率极低,尤其适合制备有回文结构的高拷贝质粒。

携带琥珀抑制基因,故允许有琥珀突变的质粒和噬菌体生长。

Eco甲基化修饰和限制系统缺失,可用甲基化和非甲基化的质粒DNA转化本菌种,扩增得到的质粒DNA均为非甲基化DNA。

本菌种具有链霉素和2-脱氧半乳糖抗性。

 


 


基因型

大肠杆菌HB101菌种的基因型是:B系,F-,l-,araC14, leuB6(Am), Δ(gpt-proA)62,lacY1, glnX44(AS), galK2(Oc), recA13, rpsL20(strR), xylA5, mtl-1, thiE1,[hsdS20](各文献上报道的基因型稍微有所不同,此处采用美国耶鲁大学Coli Genetic Stock Center的资料)。

大肠杆菌HB101菌种基因型符号及其含义列表如下:

基因型符号

含义

K-12

K-12系的所有菌种默认都携带F因子和l、e14、rac三种原噬菌体。其中的e14携带野生型mcrA基因,其产物可对甲基化的CG切割。

F-

此菌种缺失F因子

l-

此菌种缺失l原噬菌体

araC14

原ara-14,阿拉伯糖异构酶失活,不能利用阿拉伯糖

galK2(Oc)

原gal2,半乳糖激酶基因134位密码子GAA(glu) 突变为TAA(ochre),半乳糖激酶失活,不能利用半乳糖,对2脱氧半乳糖抗性

glnX44(AS)

原glnV44、supE44和su+II,tRNA反密码子第三位的C to T,使琥珀终止子UAG编码谷氨酰胺,是琥珀抑制突变(ambersuppressor,AS),为某些质粒和噬菌体生长所需

[hsdS20]

此突变来于 E. coli B系亲本,其EcoB系统Eco位点识别能力缺失,甲基化修饰和限制功能均失,表型为rB-mB-

lacY1

半乳糖苷通透酶突变,不能转入半乳糖,使IPTG诱导增效

leuB6(Am)

b-异丙基苹果酸脱氢酶基于发生琥珀突变(UAG),酶失活,不能合成亮氨酸

mtl-1

不能利用甘露糖醇

Δ(gpt-proA)62

原proA2,g-谷氨酸磷酸还原酶失活,不能合成脯氨酸

recA13

ATP依赖型重组酶失活,recBCD、recE和recF三条重组路径均复丧失,重组率降低1万倍。适合扩增有回文结构的高拷贝质粒

rpsL20

30S核糖体S12突变,导致对链霉素抗性

thiE1

原thi-1,不能合成硫氨(维生素B1)

xyl-5

不能利用木糖

 

 


 


原始文献

Boyer H.W. and Roulland-Dussoix D.1969. A complementation analysis of the restriction and modification of DNA in Escherichia coli. J. Mol. Biol. 41:459-472.

 


 


规格及成分

本产品使用塑料袋包装

成分

编号

规格

包装

大肠杆菌HB101甘油菌

2-0047

1 mL

1.5mL菌种管

使用手册

2-0047sc

1份

 

 


 


运输及保存

低温运输,-80℃保种保存,有效期3年。

 


 


使用方法

本产品可用于常规大肠杆菌感受态细胞制备、转化等实验,具体步骤请见分子克隆手册等工具书。

 


 


关联产品

大肠杆菌TG1菌种

 



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