本试剂盒仅供研究使用。

使用目的：
本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中低分子肝素(LMWH)含量。

实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡低分子肝素(LMWH)水平。用纯化的鸡低分子 肝素(LMWH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入低分子肝素 (LMWH)，再与 HRP 标记的低分子肝素(LMWH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物， 经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下 转化成最终的黄色 。颜色的深浅和样品中的低分子肝素(LMWH)呈正相关 。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中鸡低分子肝素(LMWH)浓度。
试剂盒组成

1    30 倍浓缩洗涤液    20ml×1 瓶        7    终止液        6ml×1 瓶
2    酶标试剂               6ml×1 瓶           8    标准品（120pg/ml）    0.5ml×1 瓶
3    酶标包被板           12 孔×8 条         9   标准品稀释液    1.5ml×1 瓶
4    样品稀释液           6ml×1 瓶           10    说明书        1 份
5    显色剂 A 液           6ml×1 瓶           11    封板膜        2 张
6    显色剂 B 液          6ml×1/瓶            12    密封袋        1 个
标本要求
1 ．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.     标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。
60pg/ml        5 号标准品        150μl 的原倍标准品加入     150μl 标准品稀释液
30pg/ml        4 号标准品        150μl 的 5 号标准品加入     150μl 标准品稀释液
15pg/ml        3 号标准品        150μl 的 4 号标准品加入     150μl 标准品稀释液
7.5pg/ml        2 号标准品        150μl 的 3 号标准品加入     150μl 标准品稀释液
3.75pg/ml       1 号标准品        150μl 的 2 号标准品加入    150μl 标准品稀释液

2.     加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.     温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.     配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.     洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。
6.     加酶：每孔加入酶标试剂 50μl ，空白孔除外。
7.     温育：操作同 3。
8.     洗涤：操作同 5。
9.     显色：每孔先加入显色剂 A50μl ，再加入显色剂 B50μl ，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.
10.   终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.   测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。