CAT#:JW-230750低温运输、-20℃保存
产品及特点
本产品是基于填充法(Fill-in)的双链 DNA 3 端标记试剂盒,其原理是 Klenow DNA 聚合酶以 5 端突出的 DNA 为模板,在修补 DNA 3 端的时候掺入标记了生物素的核苷酸 到新合成的 DNA 中 ,从而得到生物素标记 DNA 探针 。其原理示意图如下:
本产品具有下列特点:
1.提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分 ,简化了反应加样步骤 ,提高了标记反应的可重复性。
2.使用无外切活性的 Klenow exo- DNA 聚合酶 ,已标记 DNA 探针不会被酶降解,探 针产量更高。
3.快速 ,最快 25 分钟即可完成标记反应。
4.每次标记反应至少需要 100ng( 0. 1μg)模板 DNA 。模板 DNA 必须是线状的、 5 端突出的双链 DNA ,不能是平末端或 3 端突出的双链 DNA。
5.掺入标记核苷酸的数量精准 ,适用于某些特殊的实验 。但得到的探针比活不如随机引物法或 PCR 法制备的探针 , 因为掺入的标记核苷酸少。
6.本产品足够 30 次 20μL 体系的填入法标记实验。
7.本产品只能用于科研。
规格及成分
本产品使用五孔盒包装
成份 编号 规格 包装
5×Fill-in 标记反应液 (含生物素标记的 dNTP) 220314a 120 μL 0.5mL 绿盖管
Klenow exo- DNA 聚合酶 220314b 30 μL 0.5mL 红盖管
超纯水 210806 1 mL 1.5mL 本色管
使用手册 230750sc 1 份 无
运输及保存:低温运输 ,-20℃保存 ,有效期一年。
自备试剂:需要自备标记的核苷酸。
使用方法 1. 按下表设置反应:
成分 用量
线性 DNA(水溶液) 0. 1-4 μg
5×Fill-in 标记反应液 (含生物素标记的 dNTP) 4 μL
Klenow exo- DNA 聚合酶 1 μL
加超纯水 至 20 μL
总容积 20 μL
2.37℃孵育 15 分钟
3.75℃下加热 10 分钟灭活 Klenow exo-DNA 聚合酶。
4.所得的标记 DNA 可以用于各种后续分析。
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