猪瘟（classical swine fever,CSF）病毒抗体检测试剂盒用于检测猪血清中的CSF病毒抗体，评估养猪场CSF疫苗免疫状况及感染猪的血清学辅助诊断。
本试剂盒采用间接ELISA法，在酶标板条微孔上预包被纯化的CSF病毒抗原。在试验中，加入稀释后的待检血清，经过温育后，若样品中含有CSF病毒特异性抗体，则与包被板上的抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物；在微孔中加入TMB底物液，经酶催化形成蓝色产物，加入终止液终止反应后，用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。

组份
1    抗原预包被板条    1块                        
2    酶结合物        12ml    
3    10倍浓缩洗涤液    50ml    
4    底物A液        6ml    
5    底物B液        6ml    
6    样本稀释液    50ml    
7    终止液        6ml
8    阴性对照        800µl
9    阳性对照        800µl
10    血清稀释        1块
11    封板膜        2张
12    说明书        1份

需自备的设备及试剂
1.微量移液器： 0.5µl～10µl、10µl～100µl、100µl～1000µl。
2.一次性移液器吸头。
3.量筒：500ml。
4.96孔板酶标仪。
5.蒸馏水或去离子水。
6.洗瓶或洗板机。

样品制备
取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

洗涤液的准备
浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

样品的稀释
在血清稀释板中按1：51的体积比稀释待检血清（例如：200μl样品稀释液中加4μl待检血清）。
注意：阴性和阳性对照不用稀释。取每个样品后都要更换吸头，准确记录每个样品在板上的位置。每个样品在加入到包被板微孔前应充分混匀。

注意事项
1.试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用前应摇匀，使用后放回2～8℃。
2.不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。
3.底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。
4.TMB（底物B液）不要暴露于强光和避免接触氧化剂。
5.检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2～8℃)。
6.所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
7.严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。
8.血清稀释板为一次性用品，不得重复使用；血清稀释板的最大容量为300μl/孔。

操作步骤
1.取预包被的检测板（根据样品多少，可拆开分次使用），将稀释好的待检血清取100μl加入到检测板孔中。同时设阴性、阳性及空白对照各1孔，取阴性及阳性对照各100μl分别加入反应孔中，空白对照仅加入100μl样本稀释液。轻轻振匀孔中样品（勿溢出）。
2.盖上封板膜，置37℃温育30分钟。
3.小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗3次。每次用洗涤液注满板孔（约350μl），静置1分钟后甩掉。洗涤3次后在干净吸水纸上拍干。
4.每孔加酶结合物100μl，盖上封板膜，置37℃温育30分钟。
5.小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤3次, 方法同2。切记最后在干净吸水纸上拍干。
6.每孔先加底物A液50µl、再加底物B液50µl，混匀、盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。
7.每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。

结果判定
以空白对照调零用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度A值。试验成立的条件是阳性对照孔A450值大于或等于0.4，阴性对照孔A450值必须小于0.1。如果试验无效，试验中的操作值得怀疑，试验应重做，并仔细检察各组分。
样品A450值大于0.2+阴性对照孔均值，判为阳性；样品A450值小于0.2+阴性对照孔均值，判为阴性；如阴性对照孔均值小于0.05按0.05计算。

有效期
贮存方法： 2 - 8ºC下贮存。
有效期： 12个月。