【产品名称】
通用名称:猪圆环病毒2型抗体(IgG)诊断试剂盒(酶联免疫法)
英文名称:Porcine Circovirus Type 2 Antibody Test Kit (ELISA), PCV2 Ab
【包装规格】
96T/盒
【预期用途】
本试剂盒用于定性测定猪血清中II型圆环病毒IgG抗体。用于评估猪场猪圆环病毒疫苗免疫状况,感染猪的血清学诊断以及猪圆环病毒病的流行病学调查。
【检验原理】
本试剂盒应用固相酶联免疫吸附试验(ELISA)原理,由包被有高纯度的猪圆环抗原的微孔反应板、辣根过氧化物酶标记的抗猪IgG及其它试剂配套组成。其反应机理为包被抗原与样本中的PCV-IgG结合,再与酶标抗猪IgG抗体形成“包被抗原+PCV-IgG+酶标抗猪IgG抗体”复合物,加入显色剂,通过酶催化反应显色。显色深浅与PCV-IgG的量成正比,当显色超过设定的临界值时结果判为阳性,表明免疫有效或有自然感染。
【试剂盒组成】
1. 猪圆环病毒2型抗原预包被微孔板条 96T×1
2. 酶标记物 (红盖) 11ml×1
3. 样品稀释液 (蓝盖) 25ml×1
4. 20X浓缩洗涤液 (透明盖) 25ml×1
5. 底物液A (棕盖) 7ml×1
6. 底物液B (黑盖) 7ml×1
7. 终止液 (黄盖) 7ml×1
8. 阳性对照 (蓝盖,已灭活) 0.5ml×1
9. 阴性对照 (蓝盖,已灭活) 0.5ml×1
10. 盖板膜 1张
11. 说明书 1份
【样品制备】 取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血、无污染。样品短期可于2~8℃保存,长期需置-20℃保存。
【样品稀释】 用样品稀释液将待检血清按40倍稀释(如5μl血清加入195μl样品稀释液中,混匀)。阴、阳性对照不用稀释。
【洗涤液配制】浓缩洗涤液使用前应恢复至室温(25℃左右),并摇动使沉淀的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。
【试验操作方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。
2.取所需用量包被微孔板条,设空白、阴性及阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。
3.阴性、阳性对照孔分别加入阴性、阳性对照血清100μl;样品孔每孔加入稀释后的血清样本100μl;空白对照孔不加。
4.混匀,置37℃反应30分钟。
5.扣去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干。
6.每孔加酶标记物100μl(空白孔除外)。置37℃反应30分钟。
7.洗涤,同步骤5。
8.每孔依次加显色剂A、显色剂B各50μl,混匀,37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl,混匀,用空白孔调零,于450nm(630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A450)。
【结果判定】
定义:N=阴性对照孔平均A值;P=阳性对照孔平均A值;S=样品孔A值;S/P=样品孔A值/阳性对照孔平均A值。
1.正常情况下P/N≥2.1即试验成立;否则不成立。
2.S/P≥0.4时判为阳性,S/P<0.3时判为阴性,0.3≤S/P<0.4时判为可疑。
当本实验结果为阴性时表明猪只抗体水平不足,建议补打相应疫苗。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测猪圆环病毒IgG抗体,不能区别疫苗免疫和野毒感染。
【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度,各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性,应避免接触皮肤和衣物,如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.微孔板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋,未用完的微孔板需放入有干燥剂的密封袋中保存(包被板开封后请于2~8℃避光保存,使用期限为1个月)。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶,使用时需恢复至室温以完全溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。
【储 存】
原包装应储存于2~8℃保鲜冷藏,切勿冷冻。
【有效期】
有效期12个月;生产日期、有效期、生产批号见外包装。