【产品名称】
通用名：鸡禽流感病毒(H5N1)抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名：Diagnostic Kit for chicken Antibodies to Avian Influenza Virus (ELISA)
【包装规格】 96T/盒
【预期用途】 禽流行性感冒简称禽流感是由禽流感病毒（Avian influenza Virus，AIV）引起的一种从呼吸系统到全身败血性的急性、高度至死性传染性疾病。鸡禽流感又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟。
    本试剂盒适用于鸡血清中禽流感病毒（H5N1）特异性抗体的检测，可用于禽流感（H5N1）疫苗免疫效果评价。
【原    理】
    本试剂盒系由预包被禽流感病毒（H5N1）抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测鸡血清或血浆中禽流感病毒（H5N1）特异性抗体。实验时，在酶标板中加入对照血清和稀释的待检血清，经温育后，若样品中含有禽流感病毒（H5N1）的特异性抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有特异性抗体。
【试剂盒组成】
序号    名称    规格（96T×1）
1.    酶标板              96T×1
2.    酶标记物  (红盖)    11ml×1
3.    样品稀释液 (蓝盖)    25ml×1
4.    20X浓缩洗涤液    25ml×1
5.    底物液A  棕盖)    7ml×1
6.    底物液B  (黑盖)     7ml×1
7.    终止液  (黄盖)     7ml×1
8.    阳性对照  (蓝盖)    0.5ml×1
9.    阴性对照  (蓝盖)    0.5ml×1
10.    盖板膜    1张
11.    说明书    1份
【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。
【样品准备】
1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。
2.用样品稀释液将待检血清按100倍稀释（如2μl血清加入198μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。
3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。
【检验方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.空白对照孔加样品稀释液100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
4.混匀，置37℃反应30分钟。
5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。
6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。置37℃反应30分钟。
7.洗涤，同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl，混匀，用空白孔调零，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。
【结果判定】
    定义：N=阴性对照孔平均A值；P=阳性对照孔平均A值；S=样品孔A值；S/P=样品孔A值/阳性对照孔平均A值。
1.正常情况下P/N≥2.1即试验成立；否则不成立。
2.S/P≥0.4时判为阳性，S/P＜0.3时判为阴性，0.3≤S/P＜0.4时判为可疑。
3.免疫鸡群：监测并记录样本当时的抗体水平，根据结果分析抗体水平的分布及鸡群免疫状态的动向。
【试验方法的局限性】
    该试验仅作为定性检测鸡血清或血浆中禽流感病毒（H5N1）抗体，根据A值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。
【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.微孔板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的微孔板需放入有干燥剂的密封袋中保存(包被板开封后请于2～8℃避光保存，使用期限为2个月)
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。
【储  存】
原包装应储存于2～8℃保鲜冷藏，切勿冷冻。
【有效期】
有效期12个月;生产日期、有效期、生产批号见外包装。