人骨髓来源巨噬细胞说明书
货号：JW-CL-0859
规格：5 x 10^5 cells/vial

描述：人骨髓来源巨噬细胞分离自骨髓；骨髓是机体的造血组织，位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用，白细胞能杀灭与抑制各种病原体，包括细菌、病毒等；某些淋巴细胞能制造抗体。因此，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨质间的网眼中，是一种海绵状的组织，能产生血细胞的骨髓略呈红色，称为红骨髓。出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大，脂肪细胞增多，相当部分红骨髓被黄骨髓取代，最后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞较易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2-3周，多用做原代培养，难以长期生存。巨噬细胞(Macrophages)是一种位于组织内的白血球，源自单核细胞，而单核细胞又来源于骨髓中的前体细胞。巨噬细胞和单核细胞皆为吞噬细胞，在脊椎动物体内参与非特异性防卫(先天性免疫)和特异性防卫(细胞免疫)。它们的主要功能是以固定细胞或游离细胞的形式对细胞残片及病原体进行噬菌作用(即吞噬以及消化)，并激活淋巴球或其他免疫细胞，令其对病原体作出反应。（建议收到后直接开展实验，不建议传代）

分离方法及质量控制：本公司生产的人骨髓来源巨噬细胞采用混合酶消化法制备而来，细胞总量约为5×105cells，细胞经CD68免疫荧光鉴定，细胞纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养试剂及培养条件：细胞专用培养基组分：基础培养基；胎牛血清；细胞生长因子；青霉素/链霉素溶液（备注：每种组分单独包装，使用前需要按比例分装，详细操作详见说明书，现用现配，效果更佳。）
推荐专用培养基货号：PCM-H-096
0.05%消化液货号：CSP048
无血清细胞冻存液：CSP077
温度：37℃
气相：95%空气，5%二氧化碳

培养特性：贴壁
细胞复苏：注意:

1.低温保存的细胞非常脆弱，请将冻存管放入37℃的水浴中解冻，尽快复苏细胞。
2.提前室温预热培养基。

1.在无菌区准备好15ml离心管和T-25培养瓶并分别加入5ml完全培养基；
2.将冻存管放入37℃水浴锅中，握住冻存管不停晃动，直到内容物完全融化。然后立即将冻存管从水浴中取出，擦干并喷洒75%乙醇，移至无菌区；
3.小心地拆卸盖子，不要碰到里面的螺纹，用移液枪轻轻吸出细胞悬液，加入到准备好的15ml离心管中，1000rpm离心5min；
4.弃上清后，轻弹离心管底部分散细胞沉淀，加入适量完全培养基重悬细胞后转入准备好的T25培养瓶（建议加液量：5~7ml）；
5.轻轻摇动培养瓶使细胞均匀分布，如有必要（如使用不透气瓶），松开阀盖，以便气体交换。
6.将培养瓶放入CO2培养箱中培养。

人骨髓来源巨噬细胞不建议传代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。

细胞冻存：

1. 常规方法收集对数期的贴壁细胞或悬浮细胞于试管中。
2. 根据培养细胞的密度和冻存管的大小确定所需冻存细胞数。
3. 将所需数目的细胞悬浮液置于离心管中，1000rmp，5 分钟离心收集培养细胞沉淀，彻底弃去离心管中的上清液。
4. 加入适量的细胞冻存液于离心管中，使细胞浓度约为 5×105-1×107 /ml。轻柔地混匀细胞，制成细胞混合液。
5. 将离心管中的细胞混合液分装于已标记的冻存管中，建议每管 1ml 或 1.5ml。
6. 直接将分装好的细胞冻存管放入-80℃超低温冰箱中，可长期冷冻保存。
7. 如果想液氮中长期保存，需先放入-80℃冰箱至少一天时间，方可移至液氮罐中保存。
8. 以上冻存步骤是按照无血清冻存液（货号：CSP077）推荐。

保存：保存条件：液氮长期存储
供应限制：仅限科研，不可用于临床

安全性：所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护
常见问题及解决方案：

1.在收到细胞后先观察培养瓶是否破裂，漏液等，如遇到上述问题请及时拍照并与我们联系。
2.贴壁细胞：培养瓶不开封，显微镜下检查细胞状态，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余少量漂浮的细胞可以去掉，留8-10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度到达85%左右，进行消化传代；如细胞仍不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，注意观察。如细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色鉴定细胞活力，并请及时拍照（多倍数多视野），包括染色照片，并联系我们。（以上仅为贴壁细胞处理方法）
3.悬浮细胞：培养瓶不开封，显微镜下检查细胞状态，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察，将整瓶细胞及培养液分批离心（1000rmp, 5min），加入适量培养基，根据离心后的细胞量进行放回培养或分瓶培养。（以上仅为悬浮细胞处理方法）
4.半悬细胞：培养瓶不开封，显微镜下检查细胞状态，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察，将整瓶细胞培养液上层悬浮细胞离心（1000rmp, 5min），重悬细胞后加入原培养瓶培养至传代。细胞数量较大，可将贴壁细胞消化下来，与上层悬浮细胞混匀传代。重悬上层悬浮细胞时必须保持下层贴壁细胞的营养条件，防止贴壁细胞缺乏营养。（以上仅为半悬细胞处理方法）

如遇到细胞培养问题请及时拍照并与我们联系，我们的技术人员会一直跟踪指导。
备注：由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考。
原代细胞体外培养周期非常有限，请尽快及时安排实验。
建议极威生物配套的专用细胞培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。