货号：JW-CL-0859
规格：5 x 10^5 cells/vial
描述：大鼠视网膜 muller 细胞分离自眼组织；Muller 细胞是视网膜神经胶质细胞中最主要和最重要的胶质细胞，参 与了视网膜神经节细胞的代谢、内环境稳态以及神经递质的运输、摄取和代谢。因而 Muller  细胞在视网膜神 经节细胞的生长、损伤、修复和再生巾起到重要的作用，是引起多利眼底疾病甚至导致失明的原因之一。现 今对视网膜 Muller  细胞的研究也经越来越受到重视，努力探寻种最有效的体外培养视网膜 Muller 细胞的方 法，以便更好的研究视网膜 Muller 细胞的功能及作用成为热点之一。

分离方法及质量控制：本公司生产的大鼠视网膜 muller 细胞采用混合酶灌流消化制备而来，细胞总量约为 5× 105 个/瓶；细胞经 Cytokeratin- 18+PAS 糖原染色鉴定，细胞纯度可达 85%以上，且不含有 HIV- 1 、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养试剂及培养条件：细胞专用培养基组分：500ml 基础培养基；胎牛血清；细胞生长因子；青霉素/链霉素溶液
（备注：每种组分单独包装 ，使用前需要按比例分装 ，详细操作详见说明书 ，现用现配 ，效果更佳。）

推荐专用培养基 大鼠视网膜 muller 细胞完全培养基

货号：  PCM-R-170
0.05%消化液货号：CSP048
无血清细胞冻存液：CSP077
温度：37℃
气相：95%空气 ，5%二氧化碳

培养特性：贴壁
细胞复苏：注意:1.低温保存的细胞非常脆弱 ，请将冻存管放入 37℃的水浴中解冻 ，尽快复苏细胞。 2.提前室温预热培养基。
1.在无菌区准备好 15ml 离心管和 T-25 培养瓶并分别加入 5ml 完全培养基；
2.将冻存管放入 37℃水浴锅中，握住冻存管不停晃动，直到内容物完全融化。然后立即将冻存管从水浴中取 出 ，擦干并喷洒 75%乙醇 ，移至无菌区；
3.小心地拆卸盖子 ，不要碰到里面的螺纹 ，用移液枪轻轻吸出细胞悬液 ，加入到准备好的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
4.弃上清后 ，轻弹离心管底部分散细胞沉淀，加入适量完全培养基重悬细胞后转入准备好的 T25 培养瓶（建 议加液量：5~7ml）；
5.轻轻摇动培养瓶使细胞均匀分布 ，如有必要（如使用不透气瓶） ，松开阀盖 ，以便气体交换。

6.将培养瓶放入 CO2 培养箱中培养。

大鼠视网膜 muller 细胞不建议传代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
细胞消化：收到细胞后，请对细胞培养瓶外表进行消毒，将细胞置于培养箱中进行 1-2 小时的缓冲，待细胞恢复基本生 长状态后 ，进行后续细胞实验。
静置后 ，显微镜下观察细胞状态 ，拍照记录细胞的贴壁情况 ，漂浮的细胞需离心收集后在离心管消化(脱落细胞处理方式) ，贴壁细胞也需消化后与脱落的细胞合并一起后重新接种。
在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：
（一）细胞未长至 85%时 ，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到生物操作台内 ，严格无菌操作 ，打开细胞培 养瓶 ，若培养瓶上无特殊标注 ，吸去剩余培养液 ，只留 6-8ml 培养液继续培养。
（二）细胞已长满（达 85-95%）。即可进行传代 ，具体步骤如下：
1.弃去培养液 ，用 PBS 洗涤 1-2 次；
2. 加入 1.0ml 胰酶消化液，37℃消化(消化时间根据不同细胞及所用胰酶有所差异)，显微镜下观察细胞消化 情况 ，若细胞回缩变圆、透亮、轻拍甁壁呈流沙样脱落 ，则迅速拿回操作台 ，加入至少双倍的完全培养液， 终止消化并轻轻吹打细胞 1-2 次 ，使其变成单细胞悬液；
3.将细胞收集于离心管中离心 1000rmp/5min ，弃上清 ，轻弹管底 ，将细胞弹散；
4.加入新鲜培养基重悬细胞 ，接种于孔板中(提前多聚赖氨酸包被孔板)；
5.待细胞贴壁后可用于后续相关实验。

注 ：

1.观察细胞密度最好用（4X 物镜）低倍镜观察 ，以便正确的判断细胞密度；观察细胞形态请用（10X 或 20X）高倍镜观察；
2.  推荐使用 0.05%胰酶/EDTA 消化液（推荐货号：JW-CSP048）;
3.  瓶中运输的培养液不能重复使用 ，请换新鲜培养液培养；
4.有些细胞贴壁不牢 ，如发现贴壁细胞有脱落 ，可离心重悬后接种到新瓶内。

保存：保存条件：液氮长期存储
供应限制：仅限科研 ，不可用于临床
安全性：所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性 ，必须在二级生物安全台内操作 ，并请注意防护

常见问题及解决方案：
1.在收到细胞后先观察培养瓶是否破裂 ，漏液等 ，如遇到上述问题请及时拍照并与我们联系。
2.贴壁细胞：培养瓶不开封，显微镜下检查细胞状态，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2 小时后观察， 如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余少量漂浮的细胞可以去掉，留 8-10ml 培养液培养观察， 细胞生长至汇合度到达 85%左右，进行消化传代；如细胞仍不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养  瓶加部分培养液继续培养，注意观察。如细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色鉴定细胞活力，并请及时拍照（多  倍数多视野） ，包括染色照片 ，并联系我们。（以上仅为贴壁细胞处理方法）
3.悬浮细胞：培养瓶不开封，显微镜下检查细胞状态，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2 小时后观察， 将整瓶细胞及培养液分批离心（1000rmp, 5min），加入适量培养基，根据离心后的细胞量进行放回培养或  分瓶培养。（以上仅为悬浮细胞处理方法）
4.半悬细胞：培养瓶不开封，显微镜下检查细胞状态，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2 小时后观察， 将整瓶细胞培养液上层悬浮细胞离心（1000rmp, 5min），重悬细胞后加入原培养瓶培养至传代。细胞数量  较大 ，可将贴壁细胞消化下来 ，与上层悬浮细胞混匀传代。重悬上层悬浮细胞时必须保持下层贴壁细胞的营  养条件 ，防止贴壁细胞缺乏营养。（以上仅为半悬细胞处理方法）
如遇到细胞培养问题请及时拍照并与我们联系 ，我们的技术人员会一直跟踪指导。

备注：由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同 ，以上方法仅供各实验室参考。 原代细胞体外培养周期非常有限 ，请尽快及时安排实验。建议极威生物配套的专用细胞培养基及正确的操作方法来培养 ，以此保证该细胞的最佳培养状态。