超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒产品说明书

主要用途
超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase；SOD）活性检测试剂是一种旨在通过比色测定高度可溶性的四唑 盐在超氧化物阴离子的还原作用下产生的水溶性甲臢染料，来定量分析黄嘌呤氧化酶的还原效率，由此检 测超氧化物岐化酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种 细胞和组织，包括红细胞或线粒体中超氧化物歧化酶的活性检测以及 50%活性抑制率（IC50）。广泛运用于 医药研究、生化分析、植物生理、食品工程等方面。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景
超氧化物岐化酶（SOD），是体内的重要金属酶抗氧化剂，催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成过氧化 氢（H2O2）和分子氧（O2），破坏自由基，防止氧毒性。SOD 浓度的变化与许多疾病密切相关。检测超氧 化物岐化酶活性的方法包括氮蓝四唑（nitroblue tetrazolium；NBT）法，使用黄嘌呤和黄嘌呤氧化酶来控制 超氧化物的生成并检测超氧自由基的 NBT 的比率，其敏感度较高。但是 NBT 的还原终产物双甲臢染料水 溶性差，易和还原的黄嘌呤氧化酶相互作用。细胞色素 C（cytochrome C）还原法通过还原后的细胞色素 C 生成紫色的染料，来检测超氧自由基。但是还原后的细胞色素 C 的吸收峰过窄而敏感性差，并且受到与细 胞色素 C 反应的细胞提取物，例如 NADPH 还原酶或其他的还原剂干扰，造成背景噪音高，而无法测定低 水平的 SOD 活性。

超氧化物歧化酶活性检测试剂使用高度水溶性的四唑盐:WST- 1[(2-(4-Iodophenyl)-3- (4-nitrophenyl)-
5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium ，monosodium salt)；2-(4–碘苯基)-3-(4–硝基苯基)-5-(2,4-苯二磺酸)-2H-  四唑单钠盐]。WST- 1灵敏度高，氧化态的吸光度低，呈浅黄色，水溶性好，可以100%被SOD抑制，检测不
受pH影响，背景噪音低。WST- 1被O2－还原（呈现深黄色）的还原率和黄嘌呤氧化酶的活性成线性关系， 该反应能被超氧化物岐化酶（SOD）抑制（完全抑制，WST- 1呈现无色）。利用SOD能抑制WST- 1和O2－ 的 氧化还原能力来测定SOD的活性（波长为450nm的比色分析）。

产品内容
反应液（Reagent A）                             毫升
染色液（Reagent B）                             微升
催化液（Reagent C）                             微升
稀释液（Reagent D）                             毫升
补充液（Reagent E）                             毫升
产品说明书                                             1 份

保存方式
保存在－20℃冰箱里；染色液（Reagent B），避免光照，有效保证 6 月

用户自备
1.5 毫升离心管：用于反应液配制的容器
2.2 毫升离心管：用于反应液配制的容器 酶标板或比色皿：用于比色分析的容器
SOD 标准样（G&VS50004.2）：用于建立 SOD 标准曲线
酶标仪或分光光度仪：用于比色分析

实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂置入冰槽里融化，然后移出 xx 毫升反应液（Reagent A） 到新的 2.2 毫升离心管，加入 xx 微升染色液（Reagent B），轻柔混匀后，置于暗室里，标记为染色工作液。 然后移出 xx 微升稀释液（Reagent D）到新的 1.5 毫升离心管，加入 xx 微升催化液（Reagent C），轻柔混 匀后，置于冰槽里，标记为催化工作液。然后进行下列操作。

一、 样品测定
1 ． 准备好待测的样品（例如细胞或组织匀浆上清液包括红细胞以及胞浆 SOD 样品或线粒体 SOD 样品等）， 置于冰槽里
2 ． 设定好酶标仪并预热：波长 450nm
3 ． 准备好 1 个 96 孔板，做好相应标记：样品背景、零活性对照、完全活性对照、待测样品 4 ． 按下表依次加入下列试剂到 96 孔板的相应孔里：
（1） 分别移取 xx 微升含有反应液（Reagent A）和染色液（Reagent B）的染色工作液到 96 孔板的 所有孔里
（2） 然后分别移取 xx 微升含有催化液（Reagent C）和稀释液（Reagent D）的催化工作液到 96 孔 板的相应孔里
（3） 继续分别移取 xx 微升稀释液（Reagent D） 到 96 孔板的相应孔里
（4） 继续分别移取 xx 微升补充液（Reagent E） 到 96 孔板的相应孔里
（5） 最后移取 20 微升待测样品到 96 孔板的相应孔里（注意：参见注意事项6）

内容物                         样本背景    空对照（零活性）    完全活性对照       待测样品
染色工作液                  xx 微升            xx 微升                       xx 微升           xx 微升
催化工作液                  ――                  ――                           xx 微升          xx 微升
稀释液（Reagent D）xx 微升             xx 微升                          ――                ――
补充液（Reagent E）  ――                xx 微升                         xx 微升              ――
待测样品                     xx 微升               ――                             ――             xx 微升
96 孔板每孔总量         背景孔             空对照孔                   完全活性孔         样品孔
                              （240 微升）    （240 微升）           （240 微升）       （240 微升）
                                                                          
5 ． 轻轻摇动 96 孔板，混匀反应液
6 ． 放进 37℃培养箱孵育 20 分钟，避免光照
7 ． 即刻放进酶标仪检测，波长为 450nm
8 ． 计算样品 SOD 活性或含有 SOD 活性（SOD 活性＝XO 即黄嘌呤氧化酶抑制百分率）：
1）[（完全活性读数－零活性读数）－（样品活性读数－样本背景读数）]÷（完全活性读数－零活性 读数）＝实际抑制百分率
2）IC50：50％抑制率所需的样品 SOD 或样品含有 SOD 蛋白浓度（毫克/毫升）
X（所需样品蛋白浓度）＝（已知样品蛋白浓度÷实际抑制百分率）X 50%

二、样品 SOD 实际活性单位计算（建议使用超氧化物歧化酶（SOD）标准曲线测定试剂盒－G&VS50004.2）
1)      构建 SOD 标准曲线：横座标（x 轴）为每毫升 SOD 单位浓度；纵坐标（y 轴）为样品读数（吸 光单位 OD 值）
2)      根据 SOD 标准曲线，测算样品中含有 SOD 或 SOD 类物质的活性单位（单位/毫克样品） 3)      根据样品 50％抑制百分率，找到对应 SOD 活性单位（单位/毫克样品）

注意事项
1 ． 本产品为 50 次操作
2 ． 操作时，须戴手套
3 ． 操作时，须在 4℃下进行
4 ． 染色液（Reagent B）为浅黄色，如果有结晶析出，放进 37℃温育数分钟即可。染色液（Reagent B） 一旦被还原，呈现可见黄色或深黄色；如果含有 SOD ，则会呈现为无色
5 ． 每增加 10 个样品，增加染色工作液为：反应液（Reagent B）2 毫升＋染色液（Reagent B）10 微升， 和催化工作液为：稀释液（Reagent D）200 微升＋催化液（Reagent C）5 微升，以此类推。配制工作 液时，须根据样本数量配制实际工作液容量
6 ． 待测样品总量通常为 20 至 200 微克的细胞裂解悬液或 2 至 20 微克线粒体裂解悬液
7 ． 测定 20 个以上样品，建议使用排枪操作，以减少样品操作时间上的延长导致超氧化物（superoxide） 的释放而干扰精确测定
8 ． 孵育时，避免光照
9 ． 孵育后即刻比色测定
10 ．建议每个样品检测重复 3 次
11．0. 1 毫摩尔抗坏血酸（Ascorbic acid）、5 毫摩尔还原型谷胱甘肽（Glutathione）和牛血清白蛋白会增加 背景读数，干扰样品测定，但不影响实际活性检测（已有背景读数调整）
12 ．样品 SOD 实际活性单位定义：每毫克样品蛋白含有 X 微克或 X 单位 SOD 量
13 ．本公司提供系列超氧化物歧化酶分析试剂产品

质量标准
1 ． 本产品经鉴定性能稳定
2 ． 本产品经鉴定检测敏感

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺” 的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后， 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证 说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告） 与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。


订购信息
单组分订购信息

编号                                      名称                                                     规格
G&VS50001             超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒       50 次
G&VS50001             A反应液（Reagent A）                                    毫升
G&VS50001             B染色液（Reagent B）                                    毫升
G&VS50001             C催化液（Reagent C）                                    毫升
G&VS50001             D稀释液（Reagent D）                                    毫升
G&VS50001             E补充液（Reagent E）                                     毫升

试剂盒订购信息
产品编号                                                  名称                                                              规格
G&VS50001    超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒                                             50 次
G&VS50002. 1. 1    超氧化物歧化酶（SOD）细胞裂解样品制备试剂盒                       50 次
G&VS50002. 1.2    动物细胞超氧化物歧化酶（SOD）亚型制备试剂盒                        50 次
G&VS50002.2. 1    超氧化物歧化酶（SOD）组织裂解样品制备试剂盒                        50 次
G&VS50002.2.2    动物组织超氧化物歧化酶（SOD）亚型制备试剂盒                         50 次
G&VS50002.3. 1    超氧化物歧化酶（SOD）红细胞裂解样品制备试剂盒                     50 次
G&VS50002.3.2    红细胞超氧化物歧化酶（SOD）亚型制备试剂盒                              50 次
G&VS50002.4. 1    超氧化物歧化酶（SOD）植物裂解样品制备试剂盒                          50 次
G&VS50002.4.2    植物超氧化物歧化酶（SOD）亚型制备试剂盒                                  50 次
G&VS50003. 1. 1    动物细胞/组织胞浆超氧化物歧化酶（Cu/Zn SOD）分离试剂盒      50 次
G&VS50003. 1.2    植物组织胞浆超氧化物歧化酶（Cu/Zn SOD）分离试剂盒                50 次
G&VS50003.2. 1    动物细胞/组织线粒体超氧化物歧化酶（Mn/Fe SOD）分离试剂盒    50 次
G&VS50003.2.2    植物组织线粒体超氧化物歧化酶（Mn/Fe SOD）分离试剂盒             50 次
G&VS50004. 1    超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒（附标准样）                       50 次
G&VS50004.2    超氧化物歧化酶（SOD）标准曲线测定试剂盒                                       5 次