土壤亚硝酸还原酶（S-NiR）试剂盒说明书

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号: JW-C-B922，可见分光光度法
规格: 50 管/24 样

产品内容：
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存。（72.5μmol /ml的NO -溶液）
试剂二：粉剂0.1g×1瓶，4℃保存。（临用前加10mL蒸馏水充分溶解） 试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体25mL×1瓶，4℃避光保存。（使用前50℃加热溶解）
试剂五：液体25mL×1瓶，4℃保存。

产品说明：
土壤亚硝酸还原酶是反硝化作用中的关键酶之一，参与亚硝酸盐至NO的还原反应，它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率，为氮素转化规律的研究提供一定的依据。
亚硝酸还原酶可将NO2-还原为NO，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2-减少， 即540nm处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。
自备实验用品及仪器：
天平、可见分光光度计、水浴锅、低温离心机、1mL玻璃比色皿。

测定操作：
                       空白管      对照管     测定管    无底物管
风干土样（g）                  0.1          0.1    
蒸馏水（μL）                   200                        200
试剂一（μL）    200         200    
试剂二（μL）    200          200         200         200
                        混匀后，25℃反应1h
试剂三（μL）    200    200    200    200
充分震荡30s，1000rpm，4℃，离心10min
上清液（μL）    500           500         500         500
试剂四（μL）    500           500         500          500
试剂五（μL）    500           500        500           500
充分混匀，室温静置显色 10min，用蒸馏水调零，于 1mL 玻璃比色皿中测定 540nm 各管吸光值（参照注意事项二），分别记为 A 空白管、A 对照管、A 测定管、A 无底物管。A 空白管和A 无底物管只需各做一管。

酶活单位定义：每g土样每24h还原1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。S-NiR（μmol /d/g干重）=底物消耗量（μmol）÷W÷T
=C标准×[(A空白管-A 无底物管)-(A测定管-A对照管)]÷(A空白管-A无底物管)×V加样÷W÷T C标准：标准品浓度为72.5μmol /ml；V加样：反应体系加入样本的体积，0.2mL；T：反应时间， 1h=1/24d； W：样本质量，g。
注意事项：
1.配制好的试剂二需 3天内使用完。
2.若吸光值超过2，将上清液用蒸馏水（无亚硝酸盐污染）进行适当的稀释后再加入工作液显色， 并在计算公式中乘以稀释倍数。

本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！