可见分光光度法
食品中亚硝酸盐含量检测试剂盒说明书
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

货号：JW-C-A806
规格：50T/48S

产品内容：
提取液一：液体 50 mL× 1 瓶，室温保存。
提取液二：液体 50 mL× 1 瓶，室温保存。
提取液三：液体 50 mL× 1 瓶，室温保存。
提取液四：粉剂× 1 支，室温保存。
试剂一：液体 25mL× 1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体25mL× 1 瓶，4℃避光保存。
标准品：液体 1mL× 1 支，1μmol/mL 亚硝酸钠标准溶液，4℃保存。

产品说明：
在食品中，亚硝酸盐可与肉品中的肌红素结合而更安定，在食品加工业中作为保色剂，以维持 肉制品的良好外观，并防止肉毒梭状芽孢杆菌的产生，提高食用肉制品的安全，但是人体长期摄入 亚硝酸盐过量的食品，可诱发消化系统癌变。
在酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物，再与 N- 1-萘基乙二胺形成紫红 色偶氮化合物，在540nm 处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器：
天平、研钵或匀浆器、台式离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水。

操作步骤：
一、样品处理

称取样品约 1g ，破碎，加入 1 mL 提取液一，沸水浴 15min ，冷却至室温，加入 1 mL 提取液 二，震荡摇匀，加 1 mL  提取液三，用镊子加少量提取液四（约2 mg），静置30min ，10000 rpm/min离 心15 min ，取上清液待测。

二、测定步骤和操作表
1 、可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm ，蒸馏水调零。
2 、将标准品用蒸馏水稀释成 0.04µmol/mL 标准管。
3 、操作表
                       空白管             测定管                标准管
样品(µL）                                 500
标准管(µL）                                                       500
蒸馏水(µL）       500
试剂一 (µL）      500                   500                  500
试剂二(µL）       500                   500                   500
混匀，室温静置 15min ，检测A540  吸光值。注：空白管只需测定一次。

三、亚硝酸含量计算：
（1） 按样本鲜重计算
亚硝酸含量(μmol/g  鲜重）=(A 样本-A 空白）÷ [(A 标准-A 空白)÷C 标准] ×V 样本÷(W×V 样本÷V 总)=0.12× [(A 样本-A 空白）÷(A 标准-A 空白)] ÷W。

（2） 按样本蛋白浓度计算
亚硝酸含量(μmol/mg prot）=(A 样本-A 空白）÷ [(A 标准-A 空白)÷C 标准] ×V 样本÷(Cpr×V 样本) =0.04× [(A 样本-A 空白）÷(A 标准-A 空白)] ÷Cpr

V 总：加入提取液体积，3 mL；V 样本：反应中样品体积，0.5mL；C 标准：标准溶液浓度， 0.04μmol/mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。

注意事项：
（1） 试剂盒2-8℃保存。
（2） 试剂对人体有一定的危害，请穿实验服，戴手套操作。
（3） 若检测出得 OD 值在标准曲线范围外，请将样品进行适当的浓缩或稀释（A540 <0.03 浓缩，A540 > 1.5 适当稀释）。

本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！