还原糖含量检测试剂盒说明书
注意：  正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
规格：    50T/24S

产品内容：
试剂一： 液体 100mL× 1 瓶，4℃保存。
试剂二： 液体 35mL× 1 瓶，4℃保存。
标准品： 粉剂× 1 支，4℃保存， 含 10mg 无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入 1mL 蒸馏 水溶解备用，4℃可保存 1 周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。
标准品准备： 将标准品用蒸馏水稀释至 0.3 、0.25 、0.2 、0. 15 、0. 1 、0.05mg/mL。

产品说明：
还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄糖、果 糖和麦芽糖等，是最常见的单糖和双糖，其中葡萄糖和果糖不仅是呼吸作用的主要底物，也是进一 步合成蔗糖、淀粉和纤维素的底物。
加热促进碱性溶液中 3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖生成棕红色氨基化合物，在 540nm 有特征 吸收峰； 在一定的浓度范围内，还原糖含量与 540nm 吸光度成线性关系，根据标准曲线，即可求出 样品中还原糖的量。

试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、蒸馏水。

操作步骤：
一、样品中还原糖的提取：
1.细菌或细胞的处理： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清； 按照细菌或细胞数量（104个） ：试剂一（mL）为 500~ 1000：1 的比例（建议 1000 万细菌或细胞加入 2mL 试剂一） ，超 声波破碎细菌或细胞（冰浴， 功率 20%或 200W ，超声 3s ，间隔 10s ，重复 30 次） ；转移到有 盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中 40min 并且振荡 8~ 10 次，8000g ，常温离心 10min ，取上清供测定用。
2.组织的处理： 按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~ 10  的比例（建议称取约 0.2g 组织 加入 2mL 试剂一），冰浴匀浆。转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中 40min 并且振荡 8~ 10 次，8000g ，常温离心 10min ，取上清供测定用。
3.血清（浆） 的处理： 按照血清（浆） 体积（mL）：试剂一体积(mL)为 1：5~ 10  的比例（建议取 约 0.2mL 血清（浆） 加入 1.8mL 试剂一） ，冰浴匀浆。转移到有盖离心管中（防止加热时水分 散失），80℃水浴中 40min 并且振荡 8~ 10 次，8000g ，常温离心 10min ，取上清供测定用。

二、测定操作表：
1.    在 EP 管中加入下列试剂：
试剂(μL）    对照管       测定管      标准管      空白管
样本                700           700        
标准液                                           700    
试剂二                            500         500              500
蒸馏水              500                                           700
将各管摇匀，在沸水浴加热 5min（盖紧，防止水分散失），取出后立即冷却至室温，混匀。在 540nm 波长下，用蒸馏水调零，读取标准管、对照管、测定管和空白管吸光值。计算ΔA=A  测定-A 对照。
根据标准管浓度和吸光度（为 A 标准-A 空白） 建立标准曲线，x 为吸光度，y 为标准品浓度（mg/mL）。

注意：
1.   每个测定管需设定一个对照管。
2.   如果ΔA 大于 2 ，需要将样本用试剂一稀释，计算公式中乘以相应的稀释倍数。

三、还原糖含量计算：
1 、根据标准曲线计算样品中还原糖的含量，即将ΔA（A 测定管-A 对照管） 带入 x 计算出 y 值。
2 、按样本鲜重计算：
还原糖(μg/g  鲜重)=1000×y ×V1÷W=2000×y÷W
3 、按样本蛋白浓度计算：
还原糖(μg/mg prot)=  1000×y ×V1÷（V1×Cpr ）=  1000× y÷Cpr
4 、按细菌或细胞密度计算：
还原糖(μg /104  cell)=  1000×y ×V1÷（500×V1 ）=2×y
5 、按血清（浆） 体积计算：
还原糖(μg/mL)=1000×y ×V2÷V3= 10000×y
1000：1mg/mL= 1000μg/mL；V1：加入试剂一体积，2mL；V2：加入血清（浆） 和试剂一总体 积，2 mL；V3：加入血清（浆） 体积，0.2mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g； 500：细菌或细胞密度，500 万/mL。

本产品仅供科学研究使用！ 请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！