γ-谷氨酰转移酶(γ-glutamyltranspeptidase)活性测定试剂盒
（货号：JW-G009     分光法 48 样）

一、产品简介：
γ-谷氨酰转移酶(γ-glutamyltranspeptidase ，γ-GT ，EC 2.3.2.2) ，又称γ-谷氨酰转肽酶，催 化谷胱甘肽、S-取代谷胱甘肽和其它γ-谷氨酰化合物上的γ-谷氨酰基的转移；该酶广泛分布 于生物体内，是谷氨酰循环中的关键酶，在氨基酸转运过程中起重要的作用，故它是反映 生物体代谢的一个重要指标。
γ-GT 催化谷氨酰对硝基苯胺中γ-谷氨酰基转移给 N-甘氨酰甘氨酸，生成对硝基苯胺，通过测定对硝基苯胺在 410nm 光吸收增加速率，来计算γ-GT 酶活性大小。

 二、。 测试盒组成和配制：
试剂名称            规格                      保存要求               备注
提取液          液体 60mL× 1 瓶        4℃保存    
试剂一           液体 40mL× 1 瓶       4℃保存    
试剂二          粉体 mg× 1 瓶     -20℃保存    临用前甩几下使粉末全部落入瓶底，加 入 8.8mL 的试剂一，混匀溶解备用。
试剂三           粉体 mg× 1 瓶      4℃保存    临用前甩几下使粉末全部落入瓶底，加 入 8.8mL 的试剂一，混匀溶解备用。
标准品          粉体 mg× 1 支        4℃保存    若重新做标曲，则用到该试剂。

三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL玻璃比色皿（光径1cm）、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、 研钵、乙醇、冰和蒸馏水。

四、γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！
1 、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0. 1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g） ，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。 4℃× 12000rpm 离心 10min ，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~ 10 的比例进行提取。 ② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W ，超声 3s ，间隔 10s ，重复 30 次）； 12000rpm 4℃离心 10min ，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104 ）：提取液（mL）为 500~ 1000：1 的比例进行提取。 ③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2 、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 410nm ，蒸馏水调零。 ② 所有试剂解冻至室温（25℃) 。
③ 在 1mL 玻璃比色皿中依次加入：

试剂名称(μL）    测定管
试剂一                 320
样本                    160
试剂二                 160
试剂三                 160
混匀后立即于 410nm处读取 A1 值，37℃准确反应 20min 后读取 A2 。△A=A2-A1。
【注】1.  若ΔA 小于 0.005 ，可增大样本量 V1（如增至 320μL ，试剂一相应减少）， 则改变后的 V1 需代入公式重新计算。

五、结果计算：
1 、标准曲线：y=9.5875x - 0.002：x 为标准品(μmoL) ，y 为ΔA。
2 、按样本鲜重计算：
单位定义：在 37℃ , 每克组织每分钟催化产生 1nmoL 对硝基苯胺为一个酶活单位（U）。
γ-谷氨酰转移酶(γ-GT) (nmoL/min/g  鲜重)=[(ΔA+0.002)÷9.5875] × 103÷(W×V1÷V)÷T =32.6 ×(ΔA+0.002)÷W
3 、按样本蛋白浓度计算：
单位定义：在37℃ , 每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1nmoL 对硝基苯胺为一个酶活单位（U）。
γ-谷氨酰转移酶(γ-GT) (nmoL/min/mg prot)=[(ΔA+0.002)÷9.5875] × 103÷(V1×Cpr)÷T =32.6 ×(ΔA+0.002)÷Cpr
4 、按细胞数量计算：
酶活定义：在 37℃ , 每 104 个细胞每分钟催化产生 1nmoL 对硝基苯胺为一个酶活单位（U）。
γ-谷氨酰转移酶(γ-GT) (nmoL/min/104 cell)=[(ΔA+0.002)÷9.5875] × 103÷(500×V1÷V)÷T =0.07×(ΔA+0.002)
5 、按照液体体积计算：
单位定义：在 37℃ , 每毫升液体每分钟催化产生 1nmoL 对硝基苯胺为一个酶活单位（U）。 γ-谷氨酰转移酶(γ-GT) (nmoL/min/mL)= [(ΔA+0.002)÷9.5875] × 103÷V1÷T=32.6 ×(ΔA+0.002)

V---加入提取液体积，1 mL；            V1---加入样本体积，0. 16mL；
T---反应时间，20min；                   W---样本质量，g；
500---细胞数量
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL ，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

附：标准曲线制作过程：
1、制备标准品母液（10μmol/mL）：临用前甩几下或离心，使粉体落入底部，加入 0. 1mL 乙醇，涡 旋震荡溶解后再加入 0.9mL 的蒸馏水混匀，得到 10μmol/mL 备用。
2、用蒸馏水把母液稀释成以下浓度：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1μmol/mL 。也可根据实际来调整浓度。 3      160μL 标准品+640μL 试剂一，混匀后于 410nm 处读取 A 值，依据结果即可制作标准曲线。