一、细胞基本属性

细胞货号

JW-SNL-211

细胞种属

兔

生长情况

贴壁

培养条件

DMEM+10%FBS+1% P/S

培养环境

air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

二、细胞培养操作

换液周期

2-3天

培养基体积

T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml

传代比例

1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法

1. 尽量吸干净T25瓶原培养基；

2. 加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；

3. T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；

4. 将培养瓶放入37度培养箱消化；

5. 消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；

6. 混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；

7. 加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；

8. 补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；

注意事项

不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间

消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。

三、细胞冻存操作

冻存液配方

92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐);

冻存规格

200-300万/ml，1ml每管

冻存方法

1. 消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞；

2. 将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；

3. 将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存

注意事项

冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查冻存活性，若有异常，及时调整实验方案