主要用途
RNA荧光（RiboGreen）定量检测试剂是一种旨在通过使用RiboGreen荧光染料与样品中RNA的高度结合而产 生荧光信号来精确定量样品中RNA含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。 其适用于各种分子生物学实验，例如体外转录RNA、Northern Bolt、S1核酸酶检测、RNA酶保护检测、cDNA 库制备、逆转录PCR和差异显示PCR中RNA含量分析。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，高度敏感。

技术背景
作为RNA 染色剂之一的RiboGreen 荧光染料与样品中RNA，包括rRNA、mRNA 等结合，产生荧光信号。RiboGreen  技术可以检测到低达 1 纳克 RNA 的变化。RNA 的微量增加引起荧光信号强度（Intensity）或相对荧光单位  （RFU）的显著增加。其自发荧光（Autofluorescence）忽略不计，重复性标准差异（Standard Deviation） 低，不受样品化学成分的干扰。

产品内容
染色液（Reagent A）                                                  微升
稀释液（Reagent B）                                                  毫升
标准液（Reagent C）                                                  微升
产品说明书                                                                  1 份

保存方式
保存染色液（Reagent A）和标准液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免反复冻融；其余的保存在 4℃冰 箱里，染色液（Reagent A）避免光照，有效保证 6 月

用户自备
1.5 毫升离心管：用于样品操作的容器
200 微升 1 厘米光径比色皿或黑色 96 孔板：用于荧光分析的容器
荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光定量分析

实验步骤
一、 测定准备
1． 准备好待测样品，置于冰槽里
2． 设定好荧光分光光度仪：激发波长 485±10nm，散发波长 530±12.5nm，并置零
3． 实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent A）置于冰槽里融化。然后移出 xx 微升 稀释液（Reagent B）到新的 1.5 毫升离心管，加入 xx 微升染色液（Reagent A），混匀后，用锡纸包 裹，标记为染色工作液（5 次测定量），放在暗室里。然后进行下列操作。

二、 构建标准曲线
1 ． 准备好 5 个 1.5 毫升离心管，标记为 1 至 5 号管
2 ． 分别加入 xx 微升稀释液（Reagent B）到每个离心管
3 ． 移取 xx 微升标准液（Reagent C）到 1 号管，混匀
4 ． 小心移取 xx 微升 1 号管稀释的标准液（Reagent C）到 2 号管，混匀
5 ． 小心移取 xx 微升 2 号管稀释的标准液（Reagent C）到 3 号管，混匀
6 ． 小心移取 xx 微升 3 号管稀释的标准液（Reagent C）到 4 号管，混匀
7 ． 将 1 至 5 号管放进冰槽里备用；标准管含量见下表

管号               稀释液（Reagent B）        标准液（Reagent C）        标准 DNA 总量
1                             xx 微升                            xx 微升                           xx 纳克/毫升
2                             xx 微升                            xx 微升 1 号管                 xx 纳克/毫升
3                             xx 微升                           xx 微升 2 号管                 xx 纳克/毫升
4                             xx 微升                           xx 微升 3 号管                 xx 纳克/毫升
5                             xx 微升                            空对照                                      0

8 ． 移取 xx 微升含有染色液（Reagent A）和稀释液（Reagent B）的染色工作液到新的比色皿 9 ． 加入 100 微升上述配制的标准液
10 ．室温下，孵育 5 分钟，避免光照
11．即刻放进荧光分光光度仪测读：获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU） 12 ．重复实验步骤 8 至 11 四次
13 ．绘制标准曲线：纵座标（Y 轴）为相对荧光单位（RLU）；横坐标（X 轴）为 DNA 含量（纳克/毫升）

三、 样品检测
1 ． 移取 xx 微升含有染色液（Reagent A）和稀释液（Reagent B）的染色工作液到新的比色皿 2 ． 加入 100 微升待测样品
3 ． 室温下，孵育 5 分钟，避免光照
4 ． 即刻放进荧光分光光度仪测读：获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU） 5 ． 根据标准曲线获得样品对应 RNA 含量（纳克/毫升）

注意事项
1． 本产品为 25 次操作，包括标准曲线测定
2． 整个操作须带手套，建议使用滤芯枪头，并格外小心，防止降解 RNA
3． 建议所有的操作用品属于 RNA 专用
4． 使用新鲜配制的染色工作液，务必不要超过 2 小时，且注意避光
5． 孵育时，避免光照
6． 系统检测，标准曲线测定 1 次即可；如果仪器更换，则需要重新测定 1 次
7． 如果荧光读数过高，可以相应稀释样品量
8． 盐类、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白、琼脂糖不会干扰检测
9． 如果样品中含有 DNA，建议使用 5 单位 DNA 酶，37℃孵育 90 分钟预处理
10．本公司提供系列 RNA 检测试剂产品

质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定高度敏感

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺 ”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货 后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定， 保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报 告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误 操作所致，本公司不承担由此造成的损失。


友情提醒
IF IT DOESN ’T WORK，RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息

单组分订购信息
编号                              名称                                                             规格
G&VS20129           RNA 荧光（RiboGreen）定量检测试剂盒        20 次
G&VS20129A          染色液（Reagent A）                                      微升
G&VS20129B           稀释液（Reagent B）                                      毫升
G&VS20129C           标准液（Reagent C）                                      毫升

试剂盒订购信息
产品编号                        产品名称                                         规格
G&VS12046    DEPC 水                                                        500 毫升
G&VS12047    DMDC 水                                                       500 毫升
G&VS20016.1    DEPC 处理试剂盒                                         100 次
G&VS20016.2    DMDC 处理试剂盒                                         100 次
G&VS12039.1    RNA 样品储存液                                         50 毫升
G&VS12039.2    纯化 RNA 样品储存液                                50 毫升
G&VS20101    mRNA 纯化树脂再生试剂盒                           20 次
G&VS20127    RNA 比色法定量检测试剂盒                           20 次
G&VS20129    RNA 荧光（RiboGreen）定量检测试剂盒    20 次