一、细胞基本属性

细胞货号

JWL-519

细胞种属

人

生长情况

贴壁

培养条件

1640+10%FBS+1% P/S

培养环境

air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

二、细胞培养操作

换液周期

2-3 天

培养基体积

T25 瓶 10-12ml； 10cm 皿 12-15ml

传代比例

1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法

1.  尽量吸干净 T25 瓶原培养基；

2.  加 3-4ml 常温 PBS 轻轻润洗细胞 10-20s ，吸走润洗的 PBS；

3.  T25 瓶加 1ml 左右胰酶 ，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.  将培养瓶放入 37 度培养箱消化；

5.  消化到细胞间隙变大 ，但未完全脱落时加 2-3ml 完全培养基终止胰酶消化； 6.  混匀细胞 ，900rpm 离心 3-5min ，弃上清；

7.  加新的完全培养基轻轻重悬细胞 ，均匀分到新的培养瓶里；

8.  补足完全培养基 ，将培养瓶放回培养箱静置培养；

注意事项

不同品牌胰酶消化时间差别较大 ，注意严格控制消化时间

消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔 ，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。

三、细胞冻存操作

冻存液配方

92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或 92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐);

冻存规格

200-300 万/ml ， 1ml 每管

冻存方法

1.  消化并离心获得细胞沉淀后 ，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.  将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；

3.  将冻存管转入程序冻存盒 ，放入-80 度冰箱过夜 ，第二天转入液氮保存； 没有 程序冻存盒的实验室 ， 加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中 4 度静置 5- 10min ，再-20 度静置 2h 后转入-80 度过夜 ，第二天转入液氮保存

注意事项

冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查冻存活性 ，若有异常 ，及时调整实验方案