RAW 264.7 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞
一、细胞基本属性 | |
细胞货号 | JW-CL-0582 |
细胞种属 | 小鼠 |
生长情况 | 半贴壁 |
培养条件 | DMEM+10%FBS+1% P/S |
培养环境 | air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
二、细胞培养操作 | |
换液周期 | 2-3 天 |
培养基体积 | T25 瓶 10-12ml; 10cm 皿 12-15ml |
传代比例 | 1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定) |
传代方法 | 1. 轻轻吸走培养上清 ,留 2-3ml 培养基轻轻吹打细胞面吹下细胞; 2. 混匀细胞 ,收集细胞培养基 ,900rpm离心 3-5min ,弃上清; 3. 加新的完全培养基轻轻重悬细胞 ,均匀分到新的培养瓶里; 4. 补足完全培养基 ,将培养瓶放回培养箱静置培养; |
注意事项 | 半贴壁细胞会附着瓶底 ,但贴壁不紧 ,轻轻吸取培养基轻轻吹打细胞面就会脱 落 ,不需要胰酶消化。建议使用培养皿培养 ,更适合吹打细胞操作 ,吹打细胞注 意尽量轻柔 ,不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、细胞冻存操作 | |
冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或 92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
冻存规格 | 200-300 万/ml , 1ml 每管 |
冻存方法 | 1. 离心获得细胞沉淀后 ,加配置好的冻存液轻轻重悬细胞; 2. 将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管; 3. 将冻存管转入程序冻存盒 ,放入-80 度冰箱过夜 ,第二天转入液氮保存; 没 有程序冻存盒的实验室 ,加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中 4 度静置 5- 10min ,再-20 度静置 2h 后转入-80 度过夜 ,第二天转入液氮保存 |
注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查冻存活性 ,若有异常 ,及时调整实验方案 |
Tips:1.细胞半贴壁圆形或多角形生长,部分悬浮圆形,传代时均可收集培养,换液时将悬浮细胞离心收集后重新 接回原瓶,若贴壁细胞较多活性较好时可以不要悬浮的细胞; 2.该细胞对胰酶比较敏感,胰酶消化后细胞形态会 更多梭形,贴壁变紧,传代不建议使用胰酶消化该细胞; 3.该细胞生长较快,培养基消耗较快,培养时注意密切 关注细胞状态,密度较高、培养基有变黄趋势时及时换液避免细胞状态变差;