H19-7/IGF-IR细胞产品说明

产品描述
种属:大鼠（Rattus norvegicus）
品系：Holtzman
组织来源:脑（Brain）
疾病:未知（Unknown）
年龄:17天胚胎（ 17FD）
性别:未知（Unknown）
细胞形态：成纤维细胞（Fibroblast）
生长特性:贴壁生长（Adherent）

拆包 & 存储
1. 请立即检查包装袋是否有破损或漏液
2. 请立即将细胞培养瓶从包装盒中取出，并按照下方操作步骤进 行培养传代
注意：如为冻存管，请收到后立即解冻培养。若来不及解冻，请 储存于液氮中（存储于负80度，会降低细胞存活率）

培养瓶中细胞操作步骤
对于贴壁培养的细胞 ，寄送前 ，我们会将培养基充满整个培 养瓶 ，以减少产品运输过程中贴壁细胞的脱落。
1. 收到细胞产品后 ，请注意观察是否有污染 。将培养瓶置于倒置 显微镜下仔细检查是否浑浊、是否细菌污染 。 因在运输过程中存 在颠簸 ，且有些细胞对温度变化也很敏感 ，可能存在一些细胞脱 落漂浮的情况 ，这些细胞仍是活细胞 ，请勿丢弃 ，可离心富集后 传代使用。
2. 对于贴壁的细胞 ，在生物安全柜环境中 ，用真空泵去除培养瓶   中的多余培养基 ，至剩余5-8mL左右 ，随后将细胞置于含有5%CO2 的34℃恒温 培养箱中培养 ，拧松瓶盖 。如果细胞已经长满培养瓶   请立即传代。
3. 对于悬浮的细胞 ，在生物安全柜环境中 ，转移培养瓶中的细胞   至离心管中 ，离心200×g / 5 - 10 min ，去除上清后 ，用5mL培养基 吹散细胞 ，转移至新的培养瓶中 ，随后置于含有5% CO2 的34℃恒   温培养箱中培养。

冻存细胞操作步骤
注意：为保存细胞的高存活率，请收到产品后，立即解冻培养。
1.将冻存管置于34℃ 水浴中来回晃动，迅速解冻。为避免污染， 确保冻存管口置于水面之上。解冻需迅速，大约2分钟。
2. 一旦冻存管中液体融化后，立即取出，采用 70%酒精喷拭冻存 管表面。从此步开始，后续操作须在生物安全柜中完成。
3.将冻存管中的液体转移到含有5mL完全培养基的离心管中，   离 心200×g / 5 - 10 min ，用真空泵去除含有冻存液的上清。
4. 用完全培养基重新悬浮细胞并转移到新的培养瓶中。为保证 细胞复苏的存活率，请将培养基在34℃水浴预热后使用。
5. 将细胞置于含有5%CO2 的34℃恒温培养箱中培养。

贴壁细胞传代培养
1. 吸取并弃掉培养瓶中培养基，加入PBS清洗一次。
2. 加入 1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37 ℃培养箱中孵育，直至细胞从壁上脱落分离。此过程大约需要3  至5分钟（此处为12.5 cm2培养瓶所用体积，可根据实际情况增减 用量）。
3. 加入2mL完全培养基中和胰蛋白酶，并轻轻吹打将细胞从培养 瓶表面吹落，并使细胞分散。
4. 离心200xg/5 min ，去除上清后 ，取适量的培养基将细胞重悬,   取适量悬液置于新的培养瓶中 ，并加入新鲜细胞完全培养基至总 体积为4mL。
5. 将细胞置于含有5%CO2 的34℃恒温培养箱中培养。
传代比例：建议 1:2 至 1:3（以培养瓶底面积计算）。
培养基换液: 每隔 2至 3天。

注意：培养板需预先进行包被（包被液组分为：    0.015 mg/mL poly-l-lysine ）
培养板包被：
1、准备配置好上述包被液组分（4℃可放置1个月）。
2、向培养板中加入包被液，轻轻晃动至培养板底部全部覆盖均匀 （75cm2底面积，需加入4.5mL 包被液）。
3、将培养板置于培养箱，孵育5 min。
4、将包被液吸走，待培养皿变干后使用。

细胞冻存液
细胞冻存液，请使用产品： Cryo Frozen Medium
离心收集细胞后，加入适量冻存液（每管细胞冻存量达到10的6次 方），将冻存管放入冻存盒置于负80冰箱，24h后将冻存管转入液 氮长期保存。

使用范围
本产品仅限于科学研究，绝不可作 为动物或人类疾病的治疗产品使用。

完全培养基配制
该细胞系培养所用基本培养基为 Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium  ( D M EM ) , 配置完全培养基时需加入 10%FBS, 0.001 mg/ml puromycin, 0.2 mg/ml G418 ，1%Anti-Anti。