一、细胞基本属性
细胞货号：JW-CL-1802
细胞种属：小鼠
生长情况：贴壁
培养条件：DMEM+10%FBS+1% P/S
培养环境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

二、细胞培养操作
换液周期：2-3 天
培养基体积：T25 瓶 10-12ml； 10cm 皿 12-15ml
传代比例：1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定）
传代方法：
1.  尽量吸干净 T25 瓶原培养基；
2.  加 3-4ml 常温 PBS 轻轻润洗细胞 10-20s ，吸走润洗的 PBS；
3.  T25 瓶加 1ml 左右胰酶 ，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.  将培养瓶放入 37 度培养箱消化；
5.  消化到细胞间隙变大 ，但未完全脱落时加 2-3ml 完全培养基终止胰酶消化； 6.  混匀细胞 ，900rpm 离心 3-5min ，弃上清；
7.  加新的完全培养基轻轻重悬细胞 ，均匀分到新的培养瓶里；
8.  补足完全培养基 ，将培养瓶放回培养箱静置培养；

注意事项：不同品牌胰酶消化时间差别较大 ，注意严格控制消化时间
消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔 ，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。

三、细胞冻存操作
冻存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或 92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐);
冻存规格：200-300 万/ml ， 1ml 每管

冻存方法    
1.  消化并离心获得细胞沉淀后 ，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞；
2.  将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3.  将冻存管转入程序冻存盒 ，放入-80 度冰箱过夜 ，第二天转入液氮保存； 没有 程序冻存盒的实验室 ， 加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中 4 度静置 5- 10min ，再-20 度静置 2h 后转入-80 度过夜 ，第二天转入液氮保存

注意事项：冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查冻存活性 ，若有异常 ，及时调整实验方案
Tips：1.细胞贴壁较弱，消化时间偏短，注意控制消化时间；