产品及特点：
细胞凋亡在许多生理过程中是至关重要的 。 目前已经描述了几种鉴定细胞凋亡的方法。核内解离被认为是凋亡的关键生化事件，导致双链，低分子量 DNA 片段 以及高分子量 DNA 中的单链断裂。可以通过在酶反应中用修饰的核苷酸标记游 离的 3'-OH 末端来鉴定那些 DNA 链断裂 。 末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）可 以催化 DIG-dUTP 释放 3'-OH DNA 末端 。 DIG-dUTP 首先与生物素偶联的 抗地高辛抗体反应 ，后者与链霉抗生物素蛋白（SABC） 结合 。 结合 DAB ，在显微镜下分析凋亡细胞染色黄色。
规格及成分
本产品使用大纸盒包装
成分 编号 规格 包装
标记缓冲液 11-230510a 5mL 10mL 棕色瓶
末端转移酶 ，20× 11-230510b 100μL 0.5mL 红盖管
地高辛- 11-dUTP 溶液 ，20× 11-230510c 100μL 0.5mL 蓝盖管
封闭剂 11-230510d 20mL 30mL 棕色瓶
生物素偶联抗地高辛抗体 11-230510e 100μL 0.5mL 绿盖管
SABC ， 100× 11-230510f 100μL 0.5mL 红盖管
蛋白酶 K ，200× 11-230510g 250μL 0.5mL 白盖管
抗体稀释液 11-230510h 20mL 30mL 本色瓶
阳性对照样品 11-230510i 2 样 塑料袋
使用手册 11-230510sc 1 份 无
运输及保存
低温运输及保存 ，有效期一年。
自备试剂
中性树胶、 NaCl、Tris 、 乙酸、 3 ％H 2 O 2、双蒸水、 二甲苯等
使用方法
1.样品制备:
a. 对于细胞涂片：在室温下用 4％多聚甲醛固定 30-60 分钟，并用 PBS冲洗两次 ，每次 2-5 分钟。
b. 对于冷冻切片：在室温下用 4％多聚甲醛固定 30-60 分钟，并用 PBS冲洗两次 ，每次 2-5 分钟。
c. 对于石蜡切片：根据标准方案进行脱水和脱水组织切片 ，并用 PBS 冲洗两次 ，每次 2 分钟。
2.加入 50μL 新鲜制备的 3％ H 2 O 2 ，并在室温下孵育 10 分钟。
3.用双蒸水洗涤三次 ，每次 2 分钟。
4.用 0.01M TBS 将蛋白酶 K ，200× to 1× 工作液。
5. (0.01M TBS 的制备： 加入 8.5g NaCl, 1.2g Tris and 0.45-0.5 mL乙酸至 1L 双蒸水中 ，溶解 ，混匀 。)
6. 加入 20- 100 μL 蛋白酶 K 工作液至样品中 (仅限石蜡切片，细胞和冷冻切 片不需要蛋白 K 消化） ，并在 37℃下消化 5- 15 分钟 。然后用 0.01M TBS 冲洗 3 次 ，每次 2 分钟 。反应混合物的制备 ：加入 1 μL 末端转移 酶 ， 20× and 1 μL 地高辛- 11-dUTP 溶液 ，20×至 18 μL 标记缓冲液中 ，混匀。
7. 将反应混合物加入到样品中 ，在二氧化碳培养箱中 ， 37℃ , 孵育 2 小时。
8. 用 0.01M 的 TBS 洗涤三次 ， 每次 2 分钟 。 Rinse with 0.01M TBS three times, 2 minutes each time.
9. 加入 50 封闭剂 ，室温孵育 30 分钟 ，丢弃阻断试剂 ，在此步骤无需洗涤样品。
10. 用抗体稀释液按照 1:100 的比例稀释生物素偶联抗地高辛抗体, 混匀 ，加入 50μL 至样品中。
11. 在二氧化碳培养箱中 ， 37℃ , 孵育 2 小时
12. 用 0.01M TBS 洗涤 3 次,每次两分钟。
13. 用抗体稀释液按照 1:100 的比例稀释 SABC ，混匀，加入 50 μL 至样品中。
14. 在二氧化碳培养箱中 ， 37℃ , 孵育 2 小时
15. 用 0.01M TBS 洗涤 3 次,每次五分钟。
16. Dilute 900 μL DAB Buffer (50 μL DAB Substrate (20 X) and 50 μLDAB Chromogen (20 X) to 850μL ddH2O and mix well.
17. 在每个载玻片上加入 50μLDAB 混合物 ，避光 ，并在室温下孵育 5- 10 分钟。
18. 用双蒸水洗涤载玻片。
19. 用苏木素染液染色 5- 10 分钟.
20. 用双蒸水冲洗两次 ，每次 5 分钟。
21. 75%乙醇中室温浸泡 5 分钟；
22. 85%乙醇中室温浸泡 5 分钟；
23. 95%乙醇中室温浸泡 5 分钟；
24. 二甲苯室温浸泡 15 分钟，
25. 中性树胶封片 ：加中性树胶盖玻片封片
关联产品：白细胞 DNA 提取试剂盒（过柱法）
