主要用途

细胞 TUNEL 测定试剂是一种旨在使用标准化的化学方法，包括固着、封阻、通透等完整步骤， 从生长在切片上的新鲜培养细胞中探寻 DNA 断点，即运用修饰过的核苷酸，在末端脱氧核糖核酸转移酶 (TdT)的帮助下，对 DNA  单链或双链上断点处的 3’末端进行标记，原位探测和定量分析单细胞水平的 DNA 降解状况的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。主要适用于 各种人体、动物、植物等培养细胞的 DNA 降解测定。广泛用于细胞凋亡的研究。产品严格无菌， 即到即用， 反应敏感，操作简捷，性能稳定。

技术背景

细胞凋亡， 或细胞程序性死亡，在诸如形态发育、免疫系统调节、以及肿瘤和神经退行性疾病等各种生物 学过程中， 起着实质性的作用。凋亡细胞具有形态、生化、和分子方面的显著特征。其中内源性核酸酶的 激活，将 DNA 链在核小体间连接区切成缺口，使核内DNA 断裂成小片断。在组织细胞原位 DNA 切口处 可被末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)标记上生物素 dUTP，即 TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling)，然后通过与过氧化物酶缀合卵白素(Peroxidase conjugated avidin) 的反应， 由二氨基联苯胺(diaminobenzidine ，DAB)作用显示为棕色(过氧化物酶活性)。

保存 封阻液(Reagent  C)、酶标液(Reagent  E)、染色液(Reagent  F)和 显色液 A(Reagent G) 在－20℃冰箱里， 严格避免反复冻融， 其余的保存在 4℃冰箱里； 染色液(Reagent F)和 显色液 A  (Reagent G)，避免光照；有效保证 6 月

用户自备

小型染色缸：用于载玻片的清洗操作

光学显微镜：用于细胞染色后观察分析

甲基绿复染试剂盒(G&VS40010)：用于细胞染色后的复染

特别注意

1 ．酶标液(Reagent E) 不能在室温下冻融， 而必须在冰槽里冻融， 冻融后即刻使用； 严禁反 复冻融；考虑分装， 以备下次使用

2 ．显色液 A  (Reagent G)和 显色液 B  (Reagent H) 必须在实验操作前即刻混匀； 混匀后切忌久放不用或储存后备用；用完扔掉

3 ．显色液 A  (Reagent G)如果出现沉淀，须过滤后再用

4 ．每次移取试剂，须更换枪头，以免污染母液，影响结果

5 ．每次操作必须做一个阳性对照

实验步骤

在染色前，将－20℃冰箱里的试剂盒中 显色液 A  (Reagent  G) 置入冰槽里融化，然后移取 xx 微升 显色液 A (Reagent G) 和 xx 毫升 显色液 B (Reagent H) 到 2 毫升离心管， 充 分混匀，标记为 显色工作液，置于暗室。然后进行下列操作：

一、细胞预处理

1 ．准备好待测的生长在载玻片上的培养细胞

2 ．小心抽去细胞培养液

3 ．小心加上 xx 微升 清理液(Reagent A) 在载玻片上，铺满细胞样品表面

4 ．小心移去载玻片上的 清理液(Reagent A)

5 ．小心加上 xx 微升 固着液(Reagent B)，铺满整个样品表面

6 ．室温下孵育 30 分钟

7 ．小心移去载玻片上的 固着液(Reagent B)

8 ．室温下，将载玻片置入 xx 毫升 清理液(Reagent A) 中，孵育 2 分钟

9 ．小心移去载玻片上的 清理液(Reagent A)

10．小心加上 xx 微升 封阻液(Reagent C)，铺满整个样品表面

11．室温下孵育 30 分钟

12．室温下，将载玻片置入 xx 毫升 清理液(Reagent A) 中，孵育 5 分钟

13．小心移去载玻片上的 清理液(Reagent A)

14．小心加上 xx 微升 通透液(Reagent D)，铺满整个样品表面

15．置于冰槽里，孵育 3 分钟

16．室温下，将载玻片置入 xx 毫升 清理液(Reagent A) 中，孵育 5 分钟

17．小心移去载玻片上的 清理液(Reagent A)

二、 断点标记处理

1．小心加上 xx 微升含有 酶标液(Reagent E)，铺满整个切片样品表面

2．在 37℃湿润的培养箱里，孵育 1 小时，保持湿润，避免干燥

3．小心移去切片上的 酶标液(Reagent E)

4．室温下，小心将切片置入 xx 毫升 清理液(Reagent A) 中孵育 2 分钟

5．小心移去切片上的 清理液(Reagent A)

三、样本染色处理

1．小心加上 xx 微升 染色液(Reagent F) 在切片上，铺满整个切片样品表面

2．室温下孵育 30 分钟，避免光照

3．小心移去切片上的 染色液(Reagent F)

4．室温下，小心将切片置入 xx 毫升 清理液(Reagent A) 中孵育 2 分钟

5．小心移去切片上的 清理液(Reagent A)

6．小心加上xx 微升含有显色液A(Reagent G)和显色液B(Reagent H)的显色工作液，铺满整个切片样品表面

7．室温下孵育 5 至 10 分钟，或直至样本出现棕褐色

8．小心移去切片上含有 显色液A(Reagent G)和 显色液B(Reagent H)的 显色工作液

9．室温下，小心将切片置入 xx 毫升 清理液(Reagent A) 中浸泡 5 秒

10．小心移去切片上的 清理液(Reagent A)

11．放上盖玻片或封片

12．(选择步骤)进行甲基绿复染(注意： 建议使用甲基绿复染试剂盒－G&VS40010)

13．即刻在一般光学显微镜下观察：阳性细胞呈现棕褐色

注意事项

1．本产品为 20 次操作

2．操作时，须戴手套

3．封阻液(Reagent C) 达到 100％封闭效果，超过双氧水封闭效果

4．本产品为生物素标记，超过荧光素标记强度 1000 倍

5．本产品无需 POD 转换，直接在光学显微镜下观察，既方便，又确保信号不受影响

6．酶标液(Reagent E) 严禁反复冻融

7．清理液(Reagent A) 50 毫升置于小型染色缸里，可重复使用

8．所有操作在室温下进行，除操作中规定之外

9．每次更换试剂溶液时，保持样品表面基本晾干：可以使用餐巾绵纸吸干或枪头抽掉

10．试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面

11．细胞染色完成后，即刻进行光学显微镜观察

12．本公司提供系列细胞凋亡试剂产品

质量标准

1 ．本产品经鉴定性能稳定

2 ．本产品经鉴定显色清晰

使用承诺

极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货

后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定， 保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题， 请立即以书面形式(实验报 告)与本公司联系， 并将该产品退回， 经检验确系产品质量所致， 本公司负责更换产品。如系使用者错误 操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

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