主要用途

 活体细胞线粒体跟踪试剂是一种旨在通过快速集聚在活体线粒体的阳离子荧光染料，呈现黄绿 色，用于特异性标记和跟踪线粒体结构的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功 实验证明的。其适用于各种线粒体(动物、人体、植物、昆虫等) 的活体跟踪以及卵细胞成熟的观察。产 品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定。

技术背景

线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。线粒体大量存在于 代谢旺盛的细胞中， 如动物的心肌，肝，肾等器官和组织的细胞中。大量制备线粒体就是从这些器官组织 中提取，或从组织培养细胞中提取。在光学显微镜下线粒体呈现为颗粒状、棒状或弯曲细线。线粒体结构 和功能标记荧光探针罗丹明 123 (Rhodamine123)，是一种膜电位敏感的阳离子荧光染料， 可以自由进入细 胞， 高度选择性地聚集在线粒体。在活细胞状态下直接染色， 特异性跟踪线粒体， 借助 480nm 或 500nm 激 发波长可以清晰看到被染成黄绿色的线状或颗粒小体的线粒体。

用户自备

1.5 毫升离心管：用于细胞染色的容器

培养箱：用于反应孵育

微型台式离心机：用于沉淀细胞

荧光显微镜：用于细胞荧光分析

实验步骤

实验开始前， 将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液(Reagent B) 置入冰槽里融化， 并放在暗室 里。 清理液(Reagent A)放进 37℃恒温水槽预热。然后进行下列操作。

一、  贴壁细胞标准染色

1 ．  准备 1 个细胞培养 24 孔板的待测细胞，细胞铺满率达70％

(注意： 可以使用载玻片，载玻片培养皿， 35mm  培养皿，和其它培养孔板，见注意事项9)

2 ．  小心抽去细胞培养液

3 ．  轻轻沿着孔壁加入 xx 微升 37℃预热的用户自备的细胞培养液到细胞培养孔，覆盖培养孔表面

4 ．  轻轻加入 xx 微升 染色液(Reagent B)，轻轻摇动培养板，使其混匀

5 ．  放进 37℃细胞培养箱里孵育 10 分钟

6 ．  小心抽去含有 染色液(Reagent B) 的细胞培养液

7 ．  轻轻沿着孔壁加入 xx 毫升 37℃预热的清理液(Reagent A) 到细胞培养孔

8 ．  小心抽去 清理液(Reagent A)

9 ．  轻轻沿着孔壁加入 xx 微升 37℃预热的清理液(Reagent A) 到细胞培养孔

10．或轻轻沿着孔壁加入 xx 微升 37℃预热的用户自备的完全细胞培养液到细胞培养孔，继续培养

11．在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长 480nm 或 500nm，散发波长 530nm  (线粒体呈黄绿色)

二、 贴壁细胞快速染色

1 ．准备 1 个细胞培养 24 孔板的待测细胞，细胞铺满率达70％

(注意： 可以使用载玻片，载玻片培养皿， 35mm  培养皿，和其它培养孔板，见注意事项9)

2 ．直接加入 xx 微升(1：100 容量比) 染色液(Reagent B)，轻轻摇动培养板，使其混匀

3 ．放进 37℃细胞培养箱里孵育 10 分钟

4 ．小心抽去含有 染色液(Reagent B) 的细胞培养液

5 ．轻轻沿着孔壁加入 xx 微升 37℃预热的清理液(Reagent A)到细胞培养孔

6 ．或轻轻沿着孔壁加入 xx 微升 37℃预热的用户自备的完全细胞培养液到细胞培养孔，继续培养

7 ．在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长 480nm 或 500nm，散发波长 530nm  (线粒体呈黄绿色)

三、悬浮细胞染色

1．准备 1 个细胞培养 24 孔板的待测悬浮细胞

(注意： 可以使用载玻片，载玻片培养皿， 35mm  培养皿，和其它培养孔板，见注意事项9)

2．直接加入 xx 微升(1：100 容量比) 染色液(Reagent B)，轻轻摇动培养板，使其混匀

3．放进 37℃细胞培养箱里孵育 10 分钟

4．放进微型台式离心机离心 1 分钟，速度为 300g  (或 2000RPM；例如 EPPENDORF 5415)

5．小心抽去上清液

6．加入 xx 微升 37℃预热的 清理液(Reagent A)，混匀

7．放进微型台式离心机离心 1 分钟，速度为 300g  (或 2000RPM；例如 EPPENDORF 5415)

8．小心抽去上清液

9．加入 xx 微升 37℃预热的清理液(Reagent A) 到细胞培养孔

10．或加入 xx 微升 37℃预热的用户自备的完全细胞培养液，混匀

11．转移到新的细胞培养 24 孔板的培养孔里，继续培养

12．在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长 480nm 或 500nm，散发波长 530nm  (线粒体呈黄绿色)

四、脱离细胞染色

1 ．将胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液处理的脱离细胞(1 X 106细胞)移入到 1.5 毫升离心管

2 ．放进微型台式离心机离心 1 分钟，速度为 300g  (或 2000RPM；例如 EPPENDORF 5415)

3 ．小心抽去上清液

4 ．加入 xx 微升 37℃预热的用户自备的细胞培养液

5 ．加入 xx 微升 染色液(Reagent B)，充分混匀

6 ．放进 37℃细胞培养箱里孵育 10 分钟

7 ．放进微型台式离心机离心 1 分钟，速度为 300g  (或 2000RPM；例如 EPPENDORF 5415)

8 ．小心抽去上清液

9 ．加入 xx 微升 37℃预热的 清理液 (Reagent A)，混匀

10．放进微型台式离心机离心 1 分钟，速度为 300g  (或 2000RPM；例如 EPPENDORF 5415)

11．小心抽去上清液

12．加入 xx 微升 37℃预热的清理液(Reagent A)，混匀

13．移出 5 微升到载玻片上，放上盖玻片

14．(选择步骤)如果需要双重染色，移出 3.5 微升染色细胞到载玻片上

15．(选择步骤)加入 1 微升用户需测的第二染料，放上盖玻片

16．(选择步骤)放进 37℃细胞培养箱里孵育 10 分钟

17．在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长 480nm 或 500nm，散发波长 530nm  (线粒体呈黄绿色)

注意事项

1 ．本产品为 100 次操作

2 ．所有操作均须无菌状态下进行

3 ．操作时，须戴手套

4 ．建议细胞染色完成后，即刻进行荧光检测分析

5 ．孵育时，避免光照

6 ．剩余的染色工作液可放进－20C储存备用

7 ．本产品适合活体染色，染色持久(24 小时内)；不宜固定染色

8 ．本产品友好使用于活体双重染色

9 ．本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿， 35mm  培养皿，和各种培养孔板，须相应 调整处理液和染色液：

10.    本公司提供系列线粒体分析试剂产品

质量标准

1 ．  本产品经鉴定性能稳定

2 ．  本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺

极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后， 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证 说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告) 与本公司联系，并将该产品退回， 经检验确系产品质量所致， 本公司负责更换产品。如系使用者错误操作 所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK ，  RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

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