【原理】

        试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物氯丙嗪和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗氯丙嗪抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留氯丙嗪的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物氯丙嗪的含量。

【试剂盒技术指标】   

规       格：96孔/盒

灵 敏 度：0.5ppb

检测时间： 40min

反应率：

氯丙嗪（CIF）…………………………100％

样本回收率：

尿     样   ……………………… 85%±10%

组     织   ……………………… 85%±15%

饲     料   ……………………… 85%±15%

检测限：

尿      液………………………………… 1ppb

组      织………………………………… 0.5ppb

饲      料  ………………………………… 1ppb

【试剂盒组成】

1、 微量测试孔：1×96孔板（12条×8孔）

2、 氯丙嗪高浓度标准品溶液×1瓶：（1ml/瓶）  

3、 酶标记物      7ml……………………… 红色帽

4、 抗体工作液  7ml……………………… 绿色帽

5、 底物A液     7ml  ……………………  棕色帽

6、 底物B液     7ml  ……………………  黑色帽

7、 终  止  液     7ml  ……………………  黄色帽

8、 2X浓缩复溶液50 ml  ………………蓝色帽

9、 20X浓缩洗涤液40 ml  ……………白色帽

【 所用仪器、试剂】

具备的仪器：微孔酶标仪、氮气吹干装置、打印机、均质器 、振荡器、离心机、恒温箱、天平（感量0.01g）、刻度移液管

微量移液器：单道20µl-200µl、100µl-1000µl、多道 250µl

试          剂： 乙腈、甲醇、正己烷、无水硫酸钠

【实验前溶液配制】

配液1、将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水按照

              1：19稀释（1份浓缩洗涤液+19份去离子水），或按

             所需用量配制洗涤液。

配液2：1X样本复溶液

将2X浓缩复溶液用去离子水按照1：1稀释（1 份浓缩复溶液+1份去离子水）用于样本的复溶。

【样本前处理步骤】

样本处理前须知

处理任何样本时，都必须注意：

（1）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。

（2）实验前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。

（a）尿样本的处理方法

取50µl清亮尿样直接测定（如果尿样浑浊一定要过滤或离心10min，4000r/min，直至得到清亮尿样），暂不使用的样本应冷冻保存。

由于尿液阴性样本可能会产生背景干扰 （在某些情况下干扰数值在标准2到3之间），所以推荐标准3即1ppb作为尿液阳性结果的CUT OFF判断值。

样本稀释倍数：1

（b）组织样本（肌肉和肝脏）处理方法称取均匀后的组织样本2±0.05g ，加入6ml乙腈溶液，充分振荡2min。4000r/min以上，15℃离心10min；

1、 取上清液4ml，在65℃条件下氮气或空气流吹至完全干燥；

        肉样本：

加入1ml的 1X样本复溶液混合振荡30s，取50µl用于分析。

肉样本稀释倍数：1

   肝脏样本：

加入2ml正己烷振荡溶解，再加入1ml的1X样本复溶液混合振荡30s，4000r/min以上，15℃离心5min，去除上层；取50µl下层 与50µl的1X样本复溶液混匀；取50µl用于分析。

肝样本稀释倍数：2

（c）饲料样品的处理方法

1、 称1.0±0.05g研碎的饲料样品，加入10ml甲醇，再加入5g无水硫酸钠，放振荡器上振荡2min；15℃ 4000r/min以上离心10min；

2、 吸出离心后的上清液2ml，于56℃氮气吹干，用1 ml的1X样本复溶液溶解干燥的残留物，再加入1mL正己烷混合30s ；15℃ 4000r/min以上离心5min

3、 取50µl下层 与50µl的1X样本复溶液混匀；取50µl用于分析。

样本稀释倍数：10

【酶标免疫分析程序】   

操作步骤：

1、 从4℃冷藏环境中取出所需试剂，置室 温（20-25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2、 取出框架及需要数量的微孔，将不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。

3、 配制标准品应用液，现配现用。

配制标准品6：浓度为8ppb  

 取40µl氯丙嗪高浓度标准品溶液与460µl的1X样本

复溶液混合均匀。

配制标准品5：浓度为 4ppb

取200µl标准品6与200µl的1X样本复溶液混合均匀。  

配制标准品4：浓度为  2ppb

取200µl标准品5与200µl的1X样本复溶液混合均匀。      

配制标准液3：浓度为  1ppb

取200µl标准品4与200µl的1X样本复溶液混合均匀。

配制标准品2：浓度为  0.5ppb

取200µl标准品3与200µl的1X样本复溶液混合均匀。

配制标准品1：浓度为  0ppb

直接使用1X样本复溶液作为标准品1即0ppb 

1、 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

2、 加标准品/样本50µl /孔，然后加酶标记物50μl/孔，再加入抗体工作液50µl/孔。轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板，25℃环境反应30min。

3、 取出用洗涤液按每孔250μl洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，拍干（拍干后未被清除的气泡用干净的枪头刺破）。

4、 显色：每孔加入底物液A液50µl再加B液50µl，轻轻振荡混匀，25℃环境避光显色15min。

5、 测定：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测在5min内读完数据），测定吸光度值（OD值）。

【结果判定】

  结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含氯丙嗪的含量成负相关.