【产品简介】
利巴韦林 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析猪肉、鸡肉、饲料样品中利巴韦林残留。
【测定原理】
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物利巴韦林和微孔条上预包被的偶联抗原竞争利巴韦林抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物利巴韦林的含量成负相关，与标准曲线比较可得出相应残留物利巴韦林的含量。
【试剂盒技术指标】
规 格：96孔/盒
灵 敏 度：0.1ppm
检测时间： 75min
样本检测下限：
组织…………………………………………0.5ppm
牛奶……………………………………………2ppm
反应率：
利巴韦林……………………………………100%
回收率：
组 织…………………………………………85±10%
饲 料…………………………………………75±10%
【试剂盒组成】
1、 微量测试孔：（1X96孔板）每条8孔，一板12条
1、 标准液X6瓶：（1ml/瓶） 0ppm、0.1ppm、0.3ppm、0.9ppm、2.7ppm、8.1ppm
2、 酶标记物 12ml…………………………红色帽
3、 抗体工作液 7ml…………………………绿色帽
4、 底物液 A液 7ml…………………………棕色帽
5、 底物液 B液 7ml…………………………黑色帽
6、 终 止 液 7ml…………………………黄色帽
7、 20X浓缩洗涤液40ml…………………… 白色帽
8、 2X浓缩复溶液50 ml ………………… 蓝色帽
【所用仪器、试剂】
（1）设备：
微孔板酶标仪(450nm)、振荡器、离心机、微量移液器：20μl～200μl,100μl~1000μl 、容量瓶：100ml，500ml，1000ml
（2）试剂：甲醇、正己烷、氯化钠
【实验前溶液配制】
配液1：复溶工作液
2X复溶液在使用前请按1：1稀释
（1份浓缩复溶液+1份去离子水）
配液2：洗涤液
将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用蒸馏水稀释
20×浓缩洗涤液在使用前请按1：19稀释（1份
浓缩洗涤液+19份去离子水）（可按需配置）
【样本前处理步骤】
样本前处理须知
处理任何样本时，都必须注意：
（a）本试剂盒所检测的组织样本包括：动物组织、禽类和水产组织。eg:鸡、鸭、牛、兔、鱼、虾等。
（b）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
（c）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。
样本前处理方法
（A）动物组织样本、蛋类
1、 用均质器均质样本；称取2±0.05g样本于50ml离心管中，加入0.5g氯化钠，再加入5ml甲醇，用振荡器振荡5分钟；4000转/分以上,室温离心10分钟；
2、 取上清液2.5ml至干净玻璃试管中，于56℃水浴下氮气/空气吹干；
3、 加入1ml正己烷溶解干燥的残留物，再加1ml稀释后的复溶工作液强烈振荡混合30s，室温4000r/min以上离心5min。
（注：如出现乳化现象；可置于80度水浴十分钟后再次离心）
4、 取50 µl下层相与取150 µl稀释后的复溶工作液强烈振荡混合30s后，取50 µl用于分析。
样本稀释倍数：5
（B）牛奶
1、取1ml牛奶样本于离心管中，在3000r/min，4℃离心10min，
去除上层脂肪。
2、取50ul上清液，加入950ul 稀释后的复溶工作液混合均匀。
3、取50µl液体用于分析。
样本稀释倍数：20倍
【酶标免疫分析程序】
操作步骤：
1、 将所需试剂从冷藏环境中取出，置室温（20-25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、 按板架及需要取出微孔条，将不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
4、 加标准品/样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加抗体50µl/孔，用盖板膜封板，轻轻震荡混匀。25℃环境中反应30min。
5、 取出将孔内液体甩干，用洗液250µl/孔洗板4-5次，每次间隔15-30秒，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
6、 每孔加入酶标记物100µl，盖板膜盖板后置25℃环境中反应30min。将孔内液体甩干，用洗涤液充分洗，4-5遍（同上），用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
7、 显色：每孔加入A液50µl，再加B液50µl，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光显色15min。
测定：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测,在5min内读完数据）测定吸光度值（OD值）。
【结果判定】
结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与利巴韦林的含量成负相关。
