一、细胞传代前,将实验所需的器材全部消毒放入超净台,
1、取枪头盒,用75%的酒精全方位喷洒,消毒并擦干后,放入超净台,
2、取提前配好的完全培养基,用75%的酒精全方位喷洒,消毒并擦干后,放入超净台,
3、取15ml离心管,用75%的酒精全方位喷洒,消毒并擦干后,放入超净台,
4、取移液管,用75%的酒精全方位喷洒,消毒并擦干后,放入超净台,
5、取T25瓶,用75%的酒精全方位喷洒,消毒并擦干后,放入超净台,
悬浮培养细胞浓度很高,且培养基占到⅔培养瓶容积时,可进行分瓶传代,此处以T25培养瓶为例,从37℃培养箱中取出培养瓶,移入超净台。
取新的移液管,轻微吹打细胞悬液,让细胞混匀后,吸取10ml的细胞悬液,加入到新的T25培养瓶内,使用后的移液管装回原包装内再丢弃。
取新的移液管吸取10ml完全培养基,在每个T25培养瓶内添加5ml完全培养基,为了让细胞更好的培养,建议使用厂家出品的完全培养基,因为,厂家出品的完全培养基,是经过千种细胞的培养测试后,挑选出来的优品。
开拧瓶盖时,为避免污染,手指尽量远离瓶口,使用后的移液管装回原包装内再丢弃,将培养瓶放入37℃培养箱内,瓶盖拧松半圈,竖置培养。
注:悬浮细胞传代注意事项
1、刚复苏出来的悬浮细胞首次用5ML培养基重悬,竖着放置培养
2、待悬浮细胞培养基有了颜色变化后,可以进行补液3-7mL
3、悬浮细胞总体积达到20mL后可以进行分瓶传代
4、悬浮细胞尽量静置培养,拿取的时候动作轻柔些
5、聚团生长的悬浮细胞小聚团不用处理,大聚团可以进行轻微地吹打