收到复苏细胞，请第一时间观察细胞是否存在漏液现象，若存在漏液现象，请第一时间拍照反馈给业务人员，然后拿擦净纸擦干培养瓶表面的漏液，拿75%的酒精喷洒培养瓶表面擦净后，将培养瓶置于倒置显微镜下，仔细检查是否浑浊，是否细菌污染，若存在污染的现象，请第一时间拍照反馈给业务人员，若无，观察细胞状态是否良好。

在显微镜下，确认该悬浮细胞是单个细胞生长，还是少量聚团生长，观察后，请放入37℃培养箱中，竖置温度平衡2个小时以后，再进行处理，查阅说明书或相关文献，了解细胞的生长特性，小聚团or不聚团，明确细胞所需完全培养基（如DMEM、RPMI-1640、DMEM/F-12等），并配好细胞所对应的完全培养基（如DMEM+10%FBS+1%Anti-Anti；RPMI-1640+10%FBS+1%Anti-Anti等），

 

细胞操作前，将实验所需的器材全部消毒放入超净台，

1、取枪头盒，用75%的酒精全方位喷洒，消毒并擦干后，放入超净台，

2、取提前配好的完全培养基，用75%的酒精全方位喷洒，消毒并擦干后，放入超净台，

3、取离心管，用75%的酒精全方位喷洒，消毒并擦干后，放入超净台，

4、取移液管，用75%的酒精全方位喷洒，消毒并擦干后，放入超净台，

5、取T25瓶，用75%的酒精全方位喷洒，消毒并擦干后，放入超净台，

6、培养瓶用75%的酒精，全方位喷洒，消毒并擦干后，放入超净台，

 

撕掉封口膜，培养瓶打开时，瓶口会有一些小气泡，为避免污染，用吸引器将气泡吸除，确保瓶口内外壁附着的液体，都吸除干净，用移液管，将培养瓶里的细胞液吹打混匀后，全部转移到50ml离心管内，进行离心操作，操作时，为避免污染，手尽量远离瓶口，由于细胞液数量较多，可分2次离心，离心力200g，根据细胞特性，离心5-10min，离心完成后，用吸引器吸除离心管内的废液，吸除时，需要注意观察，避免将沉淀的细胞吸除。

取移液管，吸取7ml完全培养基，加入到离心管内，进行轻微吹打，重悬细胞，若有需要，也可以自留一些培养基，用于培养细胞，若说明书上写的是运输培养基，则要根据培养体系及时更换细胞所对应的培养基，为了让细胞更好的培养，建议使用厂家出品的完全培养基，因为厂家出品的完全培养基，是经过千种细胞的培养测试后，挑选出来的优品。

将重悬后的细胞悬液，加入到新的培养瓶内，放入37℃培养箱中竖置培养，有些悬浮细胞，可能在较长时间的横置状态运输下，会产生贴壁的情况，发现这种情况时，务必让细胞恢复竖置培养的状态，不可横置让细胞继续贴壁，细胞特性不同，增殖的时间也不同，若复苏的细胞，三天后仍增殖不明显或状态不佳，请及时咨询极威生物细胞技术员，预祝老师实验顺利。