主要用途
植物精氨酸(arginine)含量化学比色法定量检测试剂是一种旨在通过精氨酸,在碱性条件下,与羟基喹啉进行反应后,由次溴酸钠作用产生的砖红色显色产物,在分光光度仪下,即采用比色法来测定样品中精氨酸含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良坂口方法(Sakaguchi method)、成功实验证明的。其适用于各种植物组织,包括种子(seed)、叶片(leaf)、根(root)、胚胎叶(cotyledon)、上胚轴(epicotyl)等裂解萃取液样品中精氨酸水平检测。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。
技术背景
L-精氨酸(L-arginine;Arg;R)学名为2-氨基-5-胍基戊酸 L-蛋白氨基酸( (S)-2-Amino-5-guanidino pentanoic acid),是一种必需α-氨基酸,属于谷氨酰胺家属,分子式是C6H14N4O2,分子量174.20,编码为CGU、CGC、CGA、CGG、AGA、AGG。其作用在于合成蛋白质,激发免疫系统,增强一氧化氮产生,促进生长激素、胰岛素等释放。精氨酸在人体内产生,也存在于各种鱼类、红肉、禽类、豆类、全麦、乳制品、葡萄等食物中。具有舒张血管,愈合伤口,治疗心绞痛和阳痿等功能。葡萄酒工业中,精氨酸水平用于监测和控制氨基甲酸乙酯的水平。精氨酸缺陷,将导致早产、高氨血症、心肺和神经功能异常等。基于精氨酸,在碱性条件下,与羟基喹啉(8-hydroxyquinoline)进行反应,由次溴酸钠(sodium hypobromite)作用,产生显色产物,呈现砖红色,通过分光光度仪(500nm波长)来定量分析精氨酸的含量。
产品内容
清理液(Reagent A) 100毫升
裂解液(Reagent B) 50毫升
反应液(Reagent C) 15毫升
碱性液(Reagent D) 15毫升
显色液(Reagent E) 30毫升
标准液(Reagent F) 10毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存反应液(Reagent C)、显色液(Reagent E)和标准液(Reagent F)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;试剂具有腐蚀性,注意操作安全;有效保证6月
用户自备
15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器
DOUNCE匀浆器:用于裂解组织
涡旋震荡仪:用于混匀反应物
台式离心机:用于样品操作
比色皿:用于比色的容器
分光光度仪:用于比色分析
实验步骤
一、样品预处理
1. 准备好新鲜的植物组织(叶片、谷粒、种子等),并秤重以确定100至500毫克组织重量
2. (选择步骤)放进预冷的15毫升锥形离心管
3. (选择步骤)加入3毫升清理液(Reagent A)清洗1次
4. 即刻用刀片切碎组织
5. 放进一个预冷的15毫升锥形离心管
6. 加入预冷的2.5毫升裂解液(Reagent B)
7. 涡旋震荡5秒,充分混匀
8. 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器,在冰槽里用匀浆棒匀化组织(约80下)
9. 将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管,放进4℃台式离心机离心10分钟,速度为10000g
10. 小心移出上清液到新的15毫升锥形离心管
11. 移取10微升进行蛋白定量检测(注意:建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒-G&VS30030.1)
12. 放进冰槽里备用或放入—70℃冰箱里保存
二、 测定准备
1. 设定好分光光度仪(温度为4℃):波长500nm,并置零
2. 准备好5个15毫升锥形离心管,标记为1至5号管
3. 分别加入5毫升预冷的清理液(Reagent A)到每个离心管
4. 移取5毫升预冷的标准液(Reagent F)到1号管,混匀
5. 小心移取5毫升1号管稀释的标准液(Reagent F)到2号管,混匀
6. 小心移取5毫升2号管稀释的标准液(Reagent F)到3号管,混匀
7. 小心移取5毫升3号管稀释的标准液(Reagent F)到4号管,混匀
8. 将1至5号管放进冰槽里备用;标准管浓度见下表
管号 | 清理液(Reagent A) | 标准液(Reagent F) | 标准精氨酸含量 |
1 | 5毫升 | 5毫升 | 50微克/毫升 |
2 | 5毫升 | 5毫升1号管 | 25微克/毫升 |
3 | 5毫升 | 5毫升2号管 | 12.5微克/毫升 |
4 | 5毫升 | 5毫升3号管 | 6.25微克/毫升 |
5 | 5毫升 | 空对照 | 0 |
三、 标准曲线测定
1. 移取2.5毫升上述制备的标准液(Reagent F)到新的15毫升锥形离心管
2. 加入500微升反应液(Reagent C),混匀
3. 加入500微升碱性液(Reagent D),混匀
4. 置于冰槽里孵育10分钟
5. 加入1毫升冰槽里预冷的显色液(Reagent E)
6. 快速枪头混匀(注意:显示砖红色)
7. 即刻移取3毫升到预冷的比色皿
8. 即刻放进分光光度仪检测(500nm波长),获得吸光读数(OD)(注意:须在10秒之内测读)
9. 重复实验步骤1至8四次
10. 实际吸光读数:标准样吸光读数-5号管标准样吸光读数(作为空对照)
11. 构建标准曲线:纵座标(Y轴)为实际吸光读数(OD);横座标(X轴)为标准精氨酸含量(微克/毫升)
四、 样品测定
1. 移取2.5毫升上述制备的待测样品到新的15毫升锥形离心管
2. 加入500微升反应液(Reagent C),混匀
3. 加入500微升碱性液(Reagent D),混匀
4. 置于冰槽里孵育10分钟
5. 加入1毫升冰槽里预冷的显色液(Reagent E)
6. 快速枪头混匀(注意:显示砖红色)
7. 即刻移取3毫升到预冷的比色皿
8. 即刻放进分光光度仪检测(500nm波长),获得吸光读数(OD)(注意:须在10秒之内测读)
9. 实际吸光读数:样品吸光读数-5号管标准样吸光读数(作为空对照)
10. 根据标准曲线获得样品对应精氨酸含量(微克/毫升)
五、 计算样品实际含量
根据标准曲线获得样品对应精氨酸含量(微克/毫升)X样品稀释倍数X2.5(样品总量;毫升)=微克(微克/100或500毫克组织)
注意事项
1. 本产品为20次操作
2. 本产品检测范围0至50微克
3. 操作时,须戴手套
4. 试剂具有腐蚀性,注意操作安全
5. 整个操作须在冰上操作
6. 样品测定避免批量一次操作,尤其是加入显色液(Reagent E)
7. 系统操作过程中,标准样品测定只需1次
8. 如果待测样品浓度过高或过低,可以调整样品量
9. 用户可以使用:微克精氨酸/毫克蛋白或微克精氨酸/毫克组织等
10. 本公司提供系列生化学检测试剂产品
质量标准
1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK, RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称规格
G&VS19012.6 植物精氨酸含量化学比色法定量检测试剂盒 20次
G&VS19012.6A 清理液(Reagent A)100毫升
G&VS19012.6B 裂解液(Reagent B) 100毫升
G&VS19012.6C 反应液(Reagent C)50毫升
G&VS19012.6D 碱性液(Reagent D) 50毫升
G&VS19012.6E 显色液(Reagent E) 50毫升
G&VS19012.6F 标准液(Reagent F) 20毫升
试剂盒订购信息
产品编号 | 名称 | 规格 |
G&VS19012.1 | 通用型精氨酸(arginine)含量化学比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19012.2 | 细胞精氨酸(arginine))含量化学比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19012.3 | 组织精氨酸(arginine)含量化学比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19012.4 | 血液精氨酸(arginine)含量化学比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19012.5 | 体液精氨酸(arginine)含量化学比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19012.6 | 植物精氨酸(arginine)含量化学比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19012.7 | 酒类精氨酸(arginine)含量化学比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19012.8 | 饮料精氨酸(arginine)含量化学比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19229.1 | 通用型精氨酸(arginine)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19229.2 | 细胞精氨酸(arginine)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19229.3 | 组织精氨酸(arginine)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19229.4 | 血液精氨酸(arginine)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19229.5 | 体液精氨酸(arginine)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19229.6 | 植物精氨酸(arginine)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19229.7 | 酒类精氨酸(arginine)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19229.8 | 饮料精氨酸(arginine)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19230.1 | 通用型精氨酸(arginine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19230.2 | 细胞精氨酸(arginine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19230.3 | 组织精氨酸(arginine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19230.4 | 血液精氨酸(arginine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19230.5 | 体液精氨酸(arginine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19230.6 | 植物精氨酸(arginine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19230.7 | 酒类精氨酸(arginine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒 | 20次 |
G&VS19230.8 | 饮料精氨酸(arginine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒 | 20次 |