问题一：ELISA实验中的高背景或阴性对照值偏高
| 可能原因 | 建议 |
| 阴性对照孔被阳性对照或样品污染 | 洗涤时，勿将洗液溢出孔外。 |
| 洗涤不充分 | 确保在洗涤时每个孔都充满了液体，确保将残余液体从孔中移除。 |
| 酶结合物过浓 | 请检查酶结合物是否按说明书规定稀释 |
| 孵育温度过高 | 检查孵育箱的温度是否正确、稳定 |
| 底物在使用前曝光 | 应保存在暗处，避光。 |
| 读板前停留时间过长 | 加终止液后 3 分钟内读数 |
问题二：ELISA实验中的阳性对照值偏低或低吸光度
| 可能原因 | 建议 |
| 试剂未平衡至室温 | 开始实验前，将试剂盒平衡至室温 |
| 包袋中有湿气 | 首次开袋标上日期，封好未使用的孔条， 放入干燥剂。 |
| 样本中有抑制剂 | 叠氮化钠抑制HRP 的活性 |
| 试剂在使用前未混匀 | 使用前混匀试剂 |
| 洗涤步骤过于剧烈 | 降低洗涤系统的压力 |
| 实验开始后，微孔变干燥 | 实验过程勿中断，应连续完成所有的实验步骤。 |
| 检测体积偏小 | 确保移液器已校正 |
问题三：ELISA实验中的边缘效应
| 可能原因 | 建议 |
| 蒸发 | 各步之间，须使用封版胶密封反应板。 |
| 温度不均匀 | 校准孵育箱，勿叠放反应板。 |
问题四：ELISA实验中的标准曲线不佳
| 可能原因 | 建议 |
| 倍比稀释标准品时未混匀 | 稀释标准品的每一步均需混匀 |
| 过早稀释 | 标准品在快要使用时稀释 |
| 加入的体积不正确 | 使用校准过的移液器，快速、等量的将标准品分配到各个微孔中。 |
问题五：ELISA实验中的标准曲线良好，但样本无检测信号
| 可能原因 | 建议 |
| 样本中无检测物或检测物含量极低 | 设置内参，重新实验 |
| 样本中其他物质影响/ 掩盖检测 | 作适当稀释，降低其他物质的干扰，或作系列稀释，检测回收率。 |
| 样本中检测物浓度过高，Hook 效应导致假低值 | 适当倍数稀释样本，检测物浓度尽量在试剂盒检测范围内。 |
问题六：ELISA实验中的重复性较差
| 可能原因 | 建议 |
| 微孔中有气泡 | 用针尖挑破气泡 |
| 试剂未混匀 | 确保充分混匀试剂 |
| 样本中有杂质或沉淀物 | 使用前离心 |
| 微孔包被面被吸头划破 | 加液时小心操作 |
| 使用用过的封板胶纸 | 每次须使用新的封板胶封住反应孔 |
