iPS细胞完全培养基培养人诱导型多能干细胞
1.试剂和材料
iPS细胞完全培养基试剂盒

成分                                   规格      数量    储存条件
iPS细胞基础培养基          500mL    1瓶        2-8℃
iPS细胞培养基添加剂       20mL      1支      -20℃

所需的其它试剂和材料

产品                    规格           货号
Y27632               1mg        JW-H877
Matrix                  5mL        JW-H878
iPS细胞消化液    500mL    JW-H877

2.培养流程
2.1. 复苏
在开始复苏前，将所有试管、预热后的培养基和培养皿准备好， 已确保尽快完成复苏过程。
1.    将冻存管从液氮中取出，快速在37℃水浴槽中解冻，轻柔持续地摇动冻存管，直到只剩下一个小冷冻团。从水浴槽取出冻存管，70%乙醇擦拭进行消毒。
2.    使用移液管将冻存管中含有iPS细胞的冻存液轻轻转移至一个含有5-6mL已经预热的完全培养基的15mL离心管中，过程必须轻柔防止吹散细胞团。
3.     室温300g离心5min。
4.     吸出培养基，确保细胞团完整。
5.    然后缓慢加入1mL完全培养基，用手指轻弹离心管底部，使细胞团脱离底部并分散。
6.    轻轻的将此1mL细胞悬液转移至已包被的培养皿/板/瓶，根据最终培养细胞的液体体积，加入ROCK inhibitor Y27632 ，终浓度为10μM。
7.    将培养皿/板/瓶置于37℃培养箱中，每天更换培养基（换液不需要再添加Y27632 ，但培养基需提前预热）。

2.2.传代
当集落变得较大、 中心变得密集、 明亮（对比边缘） ，相邻的集落开始融合时，此时可进行传代。
1 .    传代前 ， 准备 37 ℃预热好的好无钙镁 PBS  溶液及消化液 ， 完全培养基。
2.     吸走上清，并加入 37℃预热好的 PBS 溶液清洗1次。
3.    加入适量（按 6 孔板每孔加 1ml ，6cm 皿加 2ml ，10cm 皿加 3ml  的量） 的 37℃预热好的消化液。
4.    37℃放置1-2min ，用手指轻弹皿/板/瓶身，显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离培养皿/板底，克隆内部大部分细胞成团脱落。
5.     加入适量的完全培养基终止消化。
6.     移入离心管，300g离心5min，
7.     离心后重悬（重悬步骤参照复苏4-5步）。
8.    传代比例为 1： 6—1 ： 8 ，根据最终培养细胞的液体体积，加入ROCK inhibitor Y27632 ，终
浓度为10μM。
9.    将培养皿/板/瓶置于37℃培养箱中，每天更换培养基（换液不需要再添加Y27632 ，但培养基需提前预热）。

2.3.冻存
当集落变得较大、 中心变得密集、 明亮（对比边缘） ，相邻的集落开始融合时，此时可进行传代。
1.  传代前 ， 准备 37 ℃预热好的好无钙镁 PBS 溶液及消化液 ， 完全培养基。
2.  吸走上清，并加入 37℃预热好的 PBS 溶液清洗1次。
3. 加入适量（按 6 孔板每孔加 1ml ，6cm 皿加 2ml ，10cm 皿加 3ml  的量） 的 37℃预热好的消化液。
4. 37℃放置1-2min ，用手指轻弹皿/板/瓶身，显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离培养皿/板底，克隆内部大部分细胞成团脱落。
5. 加入适量的完全培养基终止消化。
6. 移入离心管，300g离心5min。
7.  离心后重悬（重悬步骤参照复苏4-5步）。
8. 使用预冷的冻存液轻轻的重悬细胞团，然后将细胞悬液转移至冻存管，冻存按 6 孔板每孔冻 1 支，6cm 皿冻 2-4 支，10cm 皿冻 6- 12 支（冻存液为：90% iPS细胞完全培养基与 10%的DMSO。