CAT#:JW-220990-50
低温运输，-20℃保存

DNA片段加T试剂盒

产品及特点
某些DNA聚合酶具有不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有dTTP存在的情况下，可以在平末端的DNA片段的两个3’端各加上一个dT尾巴。本产品就是利用此原理开放的加T试剂盒，主要用于制备T载体或在平末端的DNA片段上加上1个T尾巴。本产品具有下列特点：
1.简单, 2X加T预混合液中含有所需要的所有成分（包括酶），不需要单独准备。
2.各成分最佳用量经过优化，用户不需要单独调试。
3.适用于任何平末端的DNA片段，包括Pfu DNA聚合酶等高保真DNA聚合酶合成的DNA片段或限制性内切酶酶切回收得到的DNA片段。
4.加T后的载体可以作为T载体使用。

规格及成分
成份                                    编号        规格            包装
2X加T预混液                220990       1.25 mL    2.0mL本色管
使用手册                       220990sc     1份                无
本产品使用塑料袋包装

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

自备试剂
平末端DNA片段、平末端质粒DNA、自备超纯水。

使用方法
一：反应前纯化处理：
1.平末端DNA片段或平末端质粒DNA可以采取胶回收和酚/氯仿抽提法等常规方法纯化，最后溶解在水或TE中，终浓度以0.1 ug/uL为宜。必须注意的是, 用Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo等具有3到5外切活性的DNA聚合酶扩增得到的DNA片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程（如酚/氯仿抽提或Proteinase K处理），否则它们将在加T反应时，将切除掉加上的T尾巴，干扰反应。
2.本产品的加尾酶在DNA的3’末端的核苷酸为T时，加T效率更高，故如果有可能，最好满足此要求。

二：加T反应
3.在干净的0.5 mL或1.5 mL离心管中，分别加入回收的DNA片段(0.2-2 ug)、25 uL 2 X 加T缓冲液、最后补水到50 uL，在PCR仪上72℃保温2小时。如果用金属浴或水浴，必须加50uL石蜡油，否则水分在反应过程中将蒸发，影响加尾效率。
4.加T反应后，加尾酶将与DNA末端紧密结合，所以必须酚/氯仿抽提去除。如果使用Proteinase K处理后再用酚/氯仿抽提效果会更好。得到的DNA溶于适量水和TE中后即可用于后续连接反应。由于加一个T不会改变DNA片段的琼脂糖电泳速度，故不能通过跑电泳检测加尾效果。

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