CAT#:JW-13-99047
低温运输，-20℃保存

川贝母电泳法PCR鉴定试剂盒

产品及特点
川贝母（Fritillariae Cirrhosae Bulbus）是百合科贝母属的川贝母、甘肃贝母、暗紫贝母、瓦布贝母、梭砂贝母和太白贝母6种贝母的干燥鳞茎，有化痰止咳、清热润肺、散结消痈之功效。由于川贝母的药用价值高、疗效显著、市场需求量大，故常有用5种其他贝母（如浙贝母、平贝母、伊贝母、湖北贝母等）混充川贝母的现象。目前川贝母鉴最常且最准确的由 2015年版《中国药典》收录的PCＲ-ＲFLP法，该法需要PCR后再进行酶切电泳分析，操作繁琐。因此本公司根据PCR原理开发了本产品，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.产品经过精心优化，分析灵敏性能到达100拷贝/反应。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据川贝母DNA高度保守区设计，in silico分析发现它只能检测川贝母，不会跟除此之外的其他生物的DNA发生交叉反应。
5.本产品足够50次20μL体系的常规PCR反应。
6.本产品只能用于定性实验，不能用于定量实验。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用五孔盒包装
成  份                                                        编号                        规格           包装
2×PCR MasterMix                                    990805                   0.5 mL    0.5 mL本色盖
超纯水                                                       210806                   1 mL       1.5 mL蓝盖管
川贝母PCR引物干粉                                   yw13-99047            50次      0.5mL白盖管
川贝母PCR阳性对照（1×10E4拷贝/μL）    pc60908-99047      250 μL    0.5mL黄盖管
使用手册                                                        13-99047sc            1份            1份
注：1、为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA片段作为阳性对照。
2、引物干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入110uL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为24个月。

自备试剂
样品DNA。

使用方法
一、样品DNA的制备
1.如果有N个样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用试剂盒提供的PCR阳性对照（1×10E4拷贝/μL，本试剂盒提供）10μL加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样品体积一样）。可以直接用水作为制备的阴性对照。
2.用自选方法纯化上述N+2个样品的DNA。本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。

二、设置PCR反应（20μL体系）
3.  标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的DNA样品，额外增加的两个管一个用于PCR阳性对照，另一个用于PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：
成分                                                       N+2个样品管    PCR阴性对照    PCR阳性对照
2×PCR MasterMix                                   各10 μL                10 μL               10 μL
川贝母PCR引物混合液                            各2 μL                  2 μL                 2 μL
N+2个样品DNA模板                                各8 μL                     -                        -
PCR阴性对照（水）                                    -                       8 μL                      -
川贝母PCR阳性对照（1×10E4拷贝/μL）    -                         -                        8 μL
3.按下表设置PCR反应：
过程                温度    时间
预变性              95℃    5 min
PCR反应
（35个循环）   95℃    45 sec
                       54℃    45 sec
                        72℃    30 sec
最后延伸        72℃    10 min

三、电泳检测
5.  取10uL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%的琼脂糖凝胶。
6.  阳性样品预期得到的扩增产物长度为230bp。如果两个阴性对照（样品制备阴性对照或PCR阴性对照）有此扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。如果所有样品和PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题（试剂，设备，程序，操作等），需要重复并排查原因。
7.  如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性，无则判定为阴性。

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