CAT#:JW-13-59200
低温运输，-20℃保存

花生源性成分PCR试剂盒

产品及特点
本试剂盒可用于检测食品或其他材料中是否有花生的成分。现代食品加工工艺极大改变了食材原有的味道、气味、色泽、纹理和质地等特性，因此传统的感官鉴别技术已经无法对食材的真伪进行准确的鉴定。同时部分食材还有致敏性，因此基于基因检测的快速灵敏的食材来源检测技术将对食品监管和安全提供重要的保障。本产品就是为满足这一需求根据PCR原理开发的产品，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA。
2.根据花生保守区域设计引物，能专一性地检测出样品中的花生成分，但不能检测其他非花生成分。
3.比ELISA更加灵敏。对混合样品中花生成分的检测下限为0.1%，对样品中花生成分的核酸检测下限为 1.0ng/µL。
4.快速，整个检测过程（按一个样品计）需2.0小时左右。
5.提供阳性标准品，便于分析实验结果。
6.本产品足够50次20μL体系的常规PCR检测。
7.本只能用于科研。

规格及成分
本产品采用五孔盒包装
成份                                                                             编号                        规格          包装材料
2×PCR MasterMix                                                       990805                 0.5 mL     0.5mL本色管
超纯水                                                                          210806                 1 mL        1.5mL蓝盖管
花生源性成分PCR引物混合液                                   yw13-59200            100 μL     0.5mL白盖管
花生源性成分PCR阳性对照（1×10E4拷贝/μL）    pc59200-NJ231930    250 μL    0.5mL黄盖管
使用手册                                                                    13-59200sc              1份           无

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂
样品DNA。

使用方法
一、样品DNA的制备
1.用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容。
2.如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在跟试剂盒所要求的起始样品体积相当的水中（如果试剂盒一次处理需要200μL样品，则此处使用200μL水），加10μL试剂盒提供的PCR阳性对照（1×10E4拷贝/μL）而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板DNA放冰上待用。

二、设置PCR反应（20μL体系）
3.对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：
成分                                                                N+2个样品管    PCR阴性对照    PCR阳性对照
2×PCR MasterMix                                              各10 μL                10 μL                10 μL
花生源性成分PCR引物混合液                             各2 μL                   2 μL                2 μL
N+2个样品DNA模板                                            各8 μL                    -                       -
PCR阴性对照（水）                                              -                         8 μL                   -
花生源性成分PCR阳性对照（1×10E4拷贝/μL）    -                         -                       8 μL
4.按下表设置PCR反应：
过程                 温度    时间
预变性             95℃    5 min
PCR反应
（35个循环）    95℃    45 sec
                          54℃    45 sec
                          72℃    30 sec
最后延伸            72℃    10 min

三、电泳检测
5.取10uL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。
6.阳性样品预期得到的扩增产物长度为110bp。如果两个阴性对照（样品制备阴性对照或PCR阴性对照）有此扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。如果所有样品和PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题（试剂，设备，程序，操作等），需要重复并排查原因。
7.如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性，无则判定为阴性。

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