CAT#:JW-13-83600
低温运输，-20℃保存

真菌通用PCR试剂盒

产品及特点
真菌(Fungus)是具细胞壁，以寄生或腐生方式生存的一类真核微生物。如今，随着放射治疗、化学治疗、广谱抗生素以及免疫制剂的广泛应用，真菌感染的几率大大增加，真菌感染引起的疾病也日益严重。同时，真菌感染往往是致命的，例如念珠菌病和曲霉病的病死率达到了惊人的36％～63％和70％以上。真菌引起的疾病因其诊断困难、病死率高而备受医学界的重视。此外，食品和中药材的真菌污染也比较严重，给人们的生命健康带来较大威胁。而传统的诊断方法，如组织病理、真菌镜检和培养，耗时长、敏感度低，难以满足临床的需求，越来越多的研究需要开发取材方便、耗时短、准确客观的非培养诊断方法。因此快速非培养法检测真菌具有重要的意义。本产品就是以PCR技术为基础开发的专门检测真菌的通用试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.产品经过精心优化，分析灵敏度高，可以达到100拷贝/反应。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据真菌通用DNA高度保守区设计，不会跟除此之外的其它DNA发生交叉反应。
5.本产品足够50次20 mL体系的PCR反应。
6.本产品只能用于定性实验，不能用于定量。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用小扁盒包装
成分                                                               编号              规格       包装材料
2×PCR MasterMix                                        990805        0.5 mL    0.5 mL本色盖
超纯水                                                          210806        1 mL        1.5 mL蓝盖管
真菌通用PCR引物混合液                       yw13-83600       0.1 mL    0.5 mL棕色管
真菌通用PCR阳性对照(1×10E7拷贝/mL)    pc83600      50 mL       0.5 mL黄盖管
使用手册                                                     83600sc        1份            无

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为24个月。

自备试剂
样品DNA。

使用方法
一、样品DNA的制备
1.如果有N个样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10 mL真菌通用PCR阳性对照（1×10E7拷贝/mL，本试剂盒提供）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。
2.用自选方法纯化上述N+2个样品的DNA。本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的核酸提取试剂盒或免提取核酸释放剂。

二、设置PCR反应（20mL体系）
3.标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的DNA样品，额外增加的两个管一个用于PCR阳性对照，另一个用于PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：
成分                                   样品管N+2个    PCR阴性对照    PCR阳性对照
2×PCR MasterMix                各10 mL           10 mL               各10 mL
真菌通用PCR引物混合液      各3 mL             3 mL                各3 mL
 N+2个待测DNA样本             各7 mL            不加                不加
超纯水                                   不加                 7 mL                不加
真菌通用PCR阳性对照
10倍稀释液                             不加                不加                 7 mL
4.上机进行PCR，PCR反应参数为:
  过程                       温度      时间
  预变性                   94℃      10 min
  PCR 反应
  （40个循环）       94℃      15 sec
                               58℃      35 sec

三、数据处理
5.取5 mL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。
6.如果两个阴性对照（样品制备阴性对照或PCR阴性对照）有扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。
7.如果所有样品和PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题（试剂，设备，程序，操作等），需要重复并排查原因。
8.如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性，无则判定为阴性。

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