CAT#:JW-13-90812
低温运输，-20℃保存

乌梢蛇PCR检测试剂盒

产品及特点
乌梢蛇（Zaocys dhumnades）又名长溜、乌梢鞭、乌药蛇，为游蛇科动物。其体形较大，无毒，生活在丘陵地带，以蛙类、蜥蜴、鱼类、鼠类等为食，广泛分布于我国各地。乌梢蛇入药被广泛使用，具有祛风湿，通经络，止痉之功效。主治风湿顽痹，肌肤麻木，筋脉拘挛，肢体瘫痪，破伤风，麻风，风疹疥癣。因此，检测乌梢蛇 DNA具有重要意义。本产品根据PCR原理开发，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.产品经过精心优化，分析灵敏性能到达100拷贝/反应。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据乌梢蛇DNA高度保守区设计，in silico分析发现它只能检测乌梢蛇，不会跟除此之外的其他的DNA发生交叉反应。
5.本产品足够50次20 μL体系的常规PCR反应。
6.本产品只能用于定性实验，不能用于定量实验。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用五孔盒包装
成  份                                      编号                          规格           包装
2×PCR MasterMix                990805                     0.5 mL       0.5 mL本色盖
超纯水                                   210806                      1 mL        1.5 mL蓝盖管
乌梢蛇PCR引物干粉        yw13-90812                   50次           0.5 mL白盖管
乌梢蛇PCR阳性
对照（1E4拷贝/μL）    pc90812- AF236676.2         250 μL    0.5 mL黄盖管
使用手册                                13-67700sc                    1份           1份

注意：
1、引物干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入110uL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
2、为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA片段作为阳性对照。
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为24个月。

自备试剂
样品DNA

使用方法
一、样品DNA的制备
1.如果有N个样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用试剂盒提供的PCR阳性对照（1E4拷贝/μL，本试剂盒提供）10 μL加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样品体积一样）。可以直接用水作为制备的阴性对照。
2.用自选方法纯化上述N+2个样品的DNA。本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。

二、设置PCR反应（20 μL体系）
3.标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的DNA样品，额外增加的两个管一个用于PCR阳性对照，另一个用于PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：
成份                                   N+2个样品管    PCR阴性对照    PCR阳性对照
2×PCR MasterMix                各10 μL           10 μL                     10 μL
乌梢蛇PCR引物混合液         各2 μL             2 μL                        2 μL
制备的N+2个DNA样品          各8 μL            不加                        不加
超纯水                                    不加               8 μL                        不加
第1步所得乌梢蛇PCR阳性对照稀释液（1E4拷贝/μL）    不加    不加    8 μL
4.上机进行PCR，PCR反应参数为:
过程                  温度    时间
预变性               95℃    5 min
PCR反应
（35个循环）    95℃    30 sec
                          55℃    30 sec
                           72℃    25 sec（采集SYBR通道的荧光信号）
溶解曲线分析        按qPCR仪器手册执行

三、电泳分析
5.取10 μL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。
6.阳性样品预期得到的扩增产物长度为334 bp。如果两个阴性对照（样品制备阴性对照或PCR阴性对照）有此扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。如果所有样品和PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题（试剂，设备，程序，操作等），需要重复并排查原因。
7.如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性，无则判定为阴性。

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