CAT#:JW-13-21841
低温运输，-20℃保存

梅毒螺旋体梅毒亚种电泳法PCR试剂盒

产品及特点
梅毒螺旋体梅毒亚种（Treponema pallidum subsp. Pallidum）是引起雅司病的病原体，人类是梅毒螺旋体梅毒亚种的唯一感染源。雅司病是一种由梅毒螺旋体梅毒亚种引起的慢性非致命性传染病。这一疾病也被称为印度痘或帕氏雅思病，主要见于非洲、亚洲、拉丁美洲和西太平洋温暖潮湿的热带地区的贫困社区。雅司病主要通过与受感染者的皮肤有直接接触而传播，过分拥挤、个人卫生欠佳以及卫生设施差都会利于疾病的传播。未经治疗，感染了此病可能会导致慢性毁形和残疾。梅毒螺旋体梅毒亚种的传播严重影响人类健康，因此快速检测梅毒螺旋体梅毒亚种具有重要的意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术。本产品就是以 PCR 技术为基础开发的专门检测梅毒螺旋体梅毒亚种的试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.产品经过精心优化，分析灵敏性能到达100拷贝/反应。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据梅毒螺旋体梅毒亚种DNA高度保守区设计，分析发现它只能检测梅毒螺旋体梅毒亚种，不会跟除此之外的其他生物的DNA发生交叉反应。
5.本产品足够50次20 mL体系的常规PCR反应。
6.本产品只能用于定性实验，不能用于定量实验。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用五孔盒包装
成分                                           编号        规格                   包装
2×PCR MasterMix                  990805        0.5 mL        0.5 mL本色盖
超纯水                                    210806        1 mL            1.5 mL蓝盖管
梅毒螺旋体梅毒亚种PCR
引物干粉                            yw14-21841     50 次            0.5 mL白盖管
梅毒螺旋体梅毒亚种PCR
阳性对照(1×10E4拷贝/mL)    pc21841        250 mL        0.5 mL黄盖管
使用手册                             13-21841sc        1份                       无
注意：引物干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入110 mL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。

自备试剂
样品DNA。

使用方法
一、样品DNA的制备
1.如果有N个样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用试剂盒提供的PCR阳性对照（1×10E4拷贝/mL，本试剂盒提供）10 mL加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样品体积一样）。可以直接用水作为制备的阴性对照。
2.用自选方法纯化上述N+2个样品的DNA。本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。

二、设置PCR反应（20 mL体系）
3.标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的DNA样品，额外增加的两个管一个用于PCR阳性对照，另一个用于PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：
成份                                    N+2个样品管    PCR阴性对照    PCR阳性对照
2×PCR MasterMix                各10 mL           10 mL                10 mL
梅毒螺旋体梅毒亚种PCR    
引物混合液                           各2 mL                2 mL                2 mL
制备的N+2个DNA样品         各8 mL                不加                 不加
超纯水                                   不加                   8 mL                不加
梅毒螺旋体梅毒亚种PCR
阳性对照(1×10E4拷贝/mL)    不加                 不加                 8 mL
4.上机进行PCR，PCR反应参数为:
过程               温度    时间
预变性            95℃    10分钟
PCR反应
（30个循环） 95℃    30秒
                       55℃    60秒
                       65℃    60秒
延伸                72℃    10分钟

三、电泳分析
5.取10 mL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。
6.阳性样品预期得到的扩增产物长度为187 bp。如果两个阴性对照（样品制备阴性对照或PCR阴性对照）有此扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。如果所有样品和PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题（试剂，设备，程序，操作等），需要重复并排查原因。
8.如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性，无则判定为阴性。

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