CAT#:JW-13-46800
低温运输，-20℃保存

盖塔病毒RT-PCR试剂盒

产品及特点
盖塔病毒（Getah Virus，GETV）是一种有包膜的单股正链RNA病毒，基因组全长约11-12kb，主要通过蚊虫传播。GETV血清学调查表明, 人、多种家畜及某些野生动物中都存在该病毒感染, 亚洲、欧洲、大洋洲一些国家的人、猪、马、牛、山羊、犬、兔、袋鼠、鸡和野鸟血清中均检测到GETV病毒抗体，因此快速检测盖塔病毒具有重要的意义。本产品就是为满足此需求而开发的、专门检测盖塔病毒的常规RT-PCR检测试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
2.产品经过精心优化，分析灵敏性能到达100拷贝/反应。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据盖塔病毒RNA高度保守区设计的，只能检测盖塔病毒，不会跟除此之外的其他生物的RNA发生交叉反应。
5.本产品足够50次20μL体系的RT-PCR反应。
6.本产品只能用于定性实验，不能用于定量实验。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用5孔盒包装
成份                                                        编号                规格    包装
2×RT-PCR Buffer                                   91202a        500 μL    0.5mL绿盖管
10×RT-PCR酶混合液                             91202b        50μL       0.5mL红盖管
超纯水                                                    210806        1 mL       1.5mL蓝盖管
盖塔病毒RT-PCR引物干粉                   yw13-46800    50 次     0.5mL白盖管
盖塔病毒阳性对照（1×10E4拷贝/μL）  pc46800        250 μL    0.5mL黄盖管
使用手册                                                13-46800sc    1份           1份
注意：引物干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入110 mL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA片段作为阳性对照。如果需要RNA片段作为阳性对照的需要单独定制。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。

自备物品
样品RNA

使用方法
一、样品RNA的制备
1.如果有N个样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL试剂盒提供的RT-PCR阳性对照（1×10E4拷贝/μL）再加上一定量的水作为制备的阳性对照，加水后其总体积跟核酸纯化试剂盒所要求的起始样品体积一样。可以用水作为制备的阴性对照。
2.用自选方法纯化上述N+2个样品的RNA。本试剂盒跟市场上大多数样品RNA提取试剂盒兼容，也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。

二、设置RT-PCR反应（20μL体系）
3.标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的RNA样品，额外增加的两个管一个用于RT-PCR阳性对照，另一个用于RT-PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：
成份                                                        N+2个样品管    RT-PCR阴性对照    RT-PCR阳性对照
2×RT-PCR Buffer                                           各10 μL               10 μL               10 μL
10×RT-PCR酶混合液                                      1 μL                      1 μL               1 μL
盖塔病毒RT-PCR引物混合液                            各2 μL                  2 μL               2 μL
制备的N+2个RNA样品                                      各7 μL                不加                不加
超纯水                                                                不加                   7 μL                不加
盖塔病毒RT-PCR阳性对照（1×10E4拷贝/μL）  不加                  不加               7 μL
4.上机进行RT-PCR，RT-PCR反应参数为:
过程                    温度    时间
逆转录                 42℃    55分钟
预变性                 95℃    5分钟
PCR反应
（30个循环）     95℃    15秒
                           55℃    60秒
                           65℃    60秒
延伸                    72℃    10分钟

三、电泳分析
5.取10 μL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。
6.阳性样品预期得到的扩增产物长度为110 bp。如果两个阴性对照（样品制备阴性对照或RT-PCR阴性对照）有此扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。
7.如果所有样品和RT-PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题（试剂，设备，程序，操作等），需要重复并排查原因。
8.如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性，无则判定为阴性。

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