CAT#:JW-13-53710
低温运输，-20℃保存

酵母菌通用电泳法PCR试剂盒

产品及特点
酵母菌（Yeast）是一类真菌，细胞核有核膜、核仁和染色体，属于真核生物。它有 90 多个属，900 多个种。其中有危害人类的假丝酵母菌，如白色念珠菌，也有对人类有益的酿酒酵母和裂殖酵母，还有作为的蛋白表达宿主菌的八四德毕赤酵母。因此快速检测酵母具有重要的意义。为此本公司以电泳法PCR技术为基础开发了专门检测酵母的试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2.  本试剂盒可检测裂殖酵母（Schizosaccharomyces Pombe）、巴斯德毕赤酵母（Komagataella Phaffii，原名Pichia Pastoris）、白色念珠菌（Candida Albicans）、酿酒酵母菌（Saccharomyces Cerevisiae）等多种酵母。
3.  产品经过精心优化，分析灵敏性能到达 100 拷贝/反应。
4.  提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
5.  特异性高，引物是根据酵母菌 DNA 高度保守区设计，分析发现它只能检测酵母，不会跟除此之外的其他生物的 DNA 发生交叉反应。
6.  本产品足够 50 次 20uL体系的常规 PCR 反应。
7.  本产品只能用于定性实验，不能用于定量实验。
8.  本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用五孔盒包装
成  份                                编号                      规格            包装
2×PCR MasterMix            990805                 0.5 mL    0.5 mL本色盖
超纯水                               210806                1 mL       1.5 mL蓝盖管
酵母菌PCR引物干粉    yw15-53710yyg         50次      0.5mL白盖管
酵母菌PCR阳性对照
（1×10E4拷贝/μL）    pc53710-Y0020765    250 μL    0.5mL黄盖管
使用手册                      13-53710sc               1份             1份
注：1、为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA片段作为阳性对照。
2、引物干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入110uL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为24个月。

自备试剂
样品DNA

使用方法
一、样品DNA的制备
1.如果有N个样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用试剂盒提供的PCR阳性对照（1×10E4拷贝/μL，本试剂盒提供）10μL加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样品体积一样）。可以直接用水作为制备的阴性对照。
2.用自选方法纯化上述N+2个样品的DNA。本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。

二、设置PCR反应（20μL体系）
3.标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的DNA样品，额外增加的两个管一个用于PCR阳性对照，另一个用于PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：
成份                               N+2个样品管    PCR阴性对照    PCR阳性对照
2×PCR MasterMix               各10 μL        10 μL                  10 μL
酵母菌PCR引物混合液        各2 μL           2 μL                   2 μL
制备的N+2个DNA样品        各8 μL          不加                     不加
超纯水                                 不加               8 μL                    不加
酵母菌PCR阳性对照
（1×10E4拷贝/μL）              不加              不加                   8 μL
4.上机进行PCR，PCR反应参数为:
过程                  温度    时间
预变性               95℃    5分钟
PCR反应
（35个循环）    95℃    15秒
                          60℃    40秒
延伸                  72℃    10分钟

三、电泳分析
5.取10μL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。
6.阳性样品预期得到的扩增产物长度:裂殖酵母是163bp；巴斯德毕赤酵母是162bp；白色念珠菌是163bp；酿酒酵母菌是141bp。如果两个阴性对照（样品制备阴性对照或PCR阴性对照）有此扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。如果所有样品和PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题（试剂，设备，程序，操作等），需要重复并排查原因。
7.如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性，无则判定为阴性。

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