CAT#:JW-13-14880
低温运输，-20℃保存

创伤弧菌电泳法PCR试剂盒

产品及特点
创伤弧菌(Vibrio vulnificus)为全球重要之海洋致病细菌，与霍乱弧菌、肠炎弧菌并列为造成人类感染疾病之三大弧菌之一。其自然生存于河海交界之处，因此又称海洋弧菌，是需要较高盐分才可生长的一种革兰氏阴性的嗜盐性弧菌。若接触受该菌污染的海产，如生蚝等食物、被海水污染，或遭海生鱼贝类、鱼具刺伤等，都可能是创伤弧菌进入人体的致病途径。感染此菌，临床上常造成严重的败血症及肢体坏死，过程相当迅速且死亡率高、严重的伤口感染、及引起胃肠道感染等。创伤弧菌一般通过分离培养进行检查，检查周期较长；快速灵敏的检出创伤弧菌对于科研和医疗都具有重要意义。本产品就是为满足此需求而开发的、专门检测创伤弧菌的PCR试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.产品经过精心优化，分析灵敏性能到达100拷贝/反应。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据创伤弧菌DNA高度保守区设计，in silico分析发现它只能检测创伤弧菌，不会跟除此之外的其他生物的DNA发生交叉反应。
5.本产品足够50次20μL体系的常规PCR反应。
6.本产品只能用于定性实验，不能用于定量实验。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用5孔盒包装
成  份                                                                  编号            规格           包装材料
2×PCR MasterMix                                           990805        0.5 mL    0.5 mL本色盖
超纯水                                                              210806        1 mL      1.5 mL蓝盖管
创伤弧菌PCR引物混合液干粉                    yw13-14880       50次       0.5mL白盖管
创伤弧菌PCR阳性对照（1×10E4拷贝/μL）    pc14880        250 μL    0.5mL黄盖管
使用手册                                                        13-14880sc     1份           1份
注意：引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入162 mL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。

自备试剂
样品DNA

使用方法
一、样品DNA的制备
1.如果有N个样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用试剂盒提供的PCR阳性对照（1×10E4拷贝/μL，本试剂盒提供）10μL加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样品体积一样）。可以直接用水作为制备的阴性对照。
2.用自选方法纯化上述N+2个样品的DNA。本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。

二、设置PCR反应（20μL体系）
3.标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的DNA样品，额外增加的两个管一个用于PCR阳性对照，另一个用于PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：
成份                                                                    N+2个样品管    PCR阴性对照    PCR阳性对照
2×PCR MasterMix                                                  各10 μL          10 μL                10 μL
创伤弧菌PCR引物混合液                                       各2 μL             2 μL                 2 μL
制备的N+2个DNA样品                                            各8 μL            不加                不加
超纯水                                                                     不加               8 μL                 不加
创伤弧菌PCR阳性对照    （1×10E4拷贝/μL）        不加              不加                  8 μL
4.上机进行PCR，PCR反应参数为:
过程                 温度    时间
预变性             95℃    5分钟
PCR反应
（30个循环）   95℃    15秒
                        55℃    60秒
                        65℃    60秒
延伸                72℃    10分钟

三、电泳分析
5.取10μL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。
6.阳性样品预期得到的扩增产物长度为110bp。如果两个阴性对照（样品制备阴性对照或PCR阴性对照）有此扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。如果所有样品和PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题（试剂，设备，程序，操作等），需要重复并排查原因。
7.如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性，无则判定为阴性。

关联产品
创伤弧菌荧光及可视化LAMP检测试剂盒