CAT#:JW-13-18820
低温运输，-20℃保存

马链球菌马亚种电泳法PCR试剂盒

产品及特点
马链球菌马亚种（Streptococcus equi subspecies equi）为链球菌属C群成员，原产地为中国。马链球菌马亚种菌体呈球形或椭圆形，革兰氏染色阳性，无运动性，不形成芽孢，但能形成荚膜，是一种能够引起马腺疫的重要病原体。马腺疫是一种马属动物的急性接触性传染病，可引起2岁以下马匹发热、咽炎、头颈淋巴结肿大、化脓及流脓性鼻液，严重可造成马匹死亡。该病是马属动物最常发的传染病之一，其发病急，传播快，流行广泛等特点，导致了世界马养殖业的严重经济损失。因此快速检测马链球菌马亚种具有重要的意义。本产品是以PCR技术为基础开发的专门检测马链球菌马亚种的试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.产品经过精心优化，分析灵敏性能到达100拷贝/反应。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据马链球菌马亚种DNA高度保守区设计，分析发现它能检测马链球菌马亚种，不会跟除此之外的其他生物的DNA发生交叉反应。
5.本产品足够50次20 μL体系的常规PCR反应。
6.本产品只能用于定性实验，不能用于定量实验。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用5孔盒包装
成  份                                                                        编号                        规格                包装材料
2×PCR MasterMix                                                        990805                0.5 mL    0.5 mL本色盖
超纯水                                                                       210806                    1 mL       1.5 mL蓝盖管
马链球菌马亚种PCR引物干粉                                yw13-18820                50 次     0.5 mL白盖管
马链球菌马亚种PCR阳性对照（1E4拷贝/μL）    pc18820-AM909652    250 μL     0.5 mL黄盖管
使用手册                                                              13-18820sc                     1份               1份
注：引物干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入110 μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。

自备试剂
样品DNA

使用方法
一、样品DNA的制备
1.如果有N个样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用试剂盒提供的PCR阳性对照（1E4拷贝/μL，本试剂盒提供）10 μL加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样品体积一样）。可以直接用水作为制备的阴性对照。
2.用自选方法纯化上述N+2个样品的DNA。本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。

二、设置PCR反应（20 μL体系）
3.标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的DNA样品，额外增加的两个管一个用于PCR阳性对照，另一个用于PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：
成份                                                N+2个样品管    PCR阴性对照    PCR阳性对照
2×PCR MasterMix                            各10 μL                 10 μL          10 μL
马链球菌马亚种PCR引物混合液      各2 μL                    2 μL            2 μL
制备的N+2个DNA样品                      各8 μL                    不加           不加
超纯水                                               不加                       8 μL            不加
马链球菌马亚种
PCR阳性对照（1E4拷贝/μL）           不加                     不加                   8 μL
4.上机进行PCR，PCR反应参数为:
过程                        温度    时间
预变性                    95℃    10 min
PCR反应
（30个循环）        95℃    30 sec
                              55℃    60 sec
                               65℃    60 sec
延伸                       72℃    10 min

三、电泳分析
5.取10 μL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。
6.阳性样品预期得到的扩增产物长度为187 bp。如果两个阴性对照（样品制备阴性对照或PCR阴性对照）有此扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。如果所有样品和PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题（试剂，设备，程序，操作等），需要重复并排查原因。
7.如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性，无则判定为阴性。

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